用于转基因检测的水果果肉总DNA提取法.pdfVIP

※生物工程 食品科学 2009, Vol. 30, No. 03 231 用于转基因检测的水果果肉总DNA提取法 1 1, 2 段婧婧 ，肖 琳 *，陈 军 (1.污染控制与资源化研究国家重点实验室，南京大学环境学院，江苏 南京 ；210093 2.苏州出入境检验检疫局，江苏苏州 215004) 摘 要：本研究以木瓜等水果果肉为实验材料，对改进的CTAB提取方法进行优化，探讨适宜的果肉冷冻干燥 粉的量和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的添加量。最终确定加入0.10g果肉冷冻干燥粉较为合适，提取缓冲液中PVP添 加1.0%时效果较好。此方法有效的去除了水果果肉中多酚和多糖类物质的影响，提取出的DNA浓度较高，A260/ A280值介于1.80～2.00之间。通过比较，改进的CTAB法优于SDS法和DNA提取试剂盒法。以所提取出的木 瓜、哈密瓜、香蕉、梨果肉总DNA为模板，对内源rbcL基因进行PCR扩增，均得到了433bp大小的目的条 带 。 关键词：转基因；水果；DNA提取 1 1, 2 DUAN Jing-jing，XIAO Lin*，CHEN Jun China； Abstract：This , addedinto 260/A280 rbc bands of about 433 bp are obtained. Key words：genetically modified organism (GMO)；fruits； DNA extraction 中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号： 转基因技术正在世界范围内对农作物的生产和改良 测的要求，需要直接从水果果肉中提取基因组DNA。 起着深刻的影响。根据美国ISAAA发布的2006年度报 水果果肉中富含多糖、多酚类物质与一些次生物质，往 [1] 告 ，转基因作物的种植面积达到1.02亿公顷，已经突 往对DNA的提取造成影响，这就需要对传统的DNA提取 破了1亿公顷大关。其中，转基因果树的研究近年来发 方法加以改进，以提取出高质量DNA。当前国内外已有 展十分迅速，已经在柑橘、梨、香蕉等20多种果树上 [9-12] 从单一水果果肉中提取总DNA进行分子检测的报道 ， [2] 成功实现了基因转化 。目前，研究者对转基因作物的 但未见适合于一般水果的通用的DNA提取方法。 安全性还存在争议。因此，为了满足广大消费者的选 本研究以木瓜、哈密瓜、梨、香蕉等常见水果果 择权和知情权，以及国际贸易的需要，建立起准确、 快速、高效的转基因成分检测技术迫在眉睫。而进行 肉为材料，在现有的植物材料DNA提取方法的基础 检测的基础和关键就是高质量基因组DNA的提取。 上，进行适当改进，以提取出高质量的水果总DNA。 对于植物基因组DNA的提取，通常采用