人参皂苷Rg1对抗脑缺血-再灌注大鼠脑组织p—JNK蛋白表达的定量分析.pdfVIP

数理医药学杂志 2010年第 23卷第 l期 文章编号：1004—4337(2010)01—0037—02 中图分类号：R743 文献标识码：A ·基础医学研究 · 人参皂苷 Rgl对抗脑缺血一再灌注大鼠脑组织 p-JNK蛋 白表达的定量分析 刘 霞# 包翠芬 魏 嘉 梁 佳 秦书俭 (辽宁中医药大学组织胚胎学教研室 沈阳 110032) 摘 要： 目的：探讨人参皂苷 Rgl对脑缺血一再灌注大 鼠脑组织 p_JNK表达 的影响。，方法：取健康雄性 SD大 鼠3O只，将其随 机分为假手术组，模型组，人参皂苷 Rgl10、20、40mg／kg组，阳性药物对照组，每组 5只。采用线栓法制作大脑中动脉栓塞模型。于 MCAO术后 6h，采用免疫印迹法对 CA1区的p~JNK蛋 白表达情况进行定量检测 。结果 ：模型组 I~JNK含量最高；假手术组含量最 低；Rgl2O、40mg／kg组和阳性药物对照组p-JNK蛋白含量显著降低，与模型组比较有显著性差异 (PO．05)，其中Rgl40mg／kg 组p_JNK蛋白含量最低。结论：人参皂苷 Rgl防治大鼠脑缺血一再灌注损伤的机制可能与抑制脑组织 p-JNK表达有关，且以高剂量 效果较好 。 关键词： 人参皂苷 Rgl； 脑缺血一再灌注 ； p-JNK； 免疫印迹 目前免疫印迹技术是科研中常用 的蛋 白定量检测方法， 轻拔出行再灌注，再灌注时间为4h。 该方法具有高效、灵敏等特点。本实验拟采用免疫印迹方法 1．4 免疫印迹检测及强度分析 对脑缺血再灌注(cerebralischemiareperfusion，CIR)后大 鼠海 MCAO术后 6h，取各组大 鼠5只，迅速断头取出右侧海 马CA1区神经细胞p-JNK的表达进行定量检测，并观察人参 马置于液氮冷冻，一8O℃冰箱保存。取冷冻脑组织 ，加入 RI— 皂苷 Rgl对 FJNK蛋 白表达的影响，以明确人参皂苷 Rgl是 PA裂 解 液，剪 碎、超 声波粉 碎 20s后 静 置 30min，4~C， 否通过调控 JNK蛋 白的表达来抑制 CIR损伤后的神经细胞 12000r／min离心20min，留取上清液。用二喹啉甲酸法测定 凋亡 蛋白含量，并按照每 20txl含 5Og蛋 白制成样品，一20~C冰箱 保存 。按实验室常规上样、电泳、转膜后，5 小牛血清 白蛋 白 1 材料与方法 室温封闭1～2h。加入一抗 (兔抗大 鼠p-JNK，稀释度为 1： 1．1 实验动物及分组 400)4℃孵育过夜 ，TBST缓冲液洗脱 3次，每次 5min；二抗 取健康雄性 SD大 鼠，饲养 7天后随机分为 6组：① 假手 (碱性磷酸酶标记的羊抗兔 G抗体，稀释度为 1：200)室温 术组；② 模型组；③ Rgl10mg／kg组；④ Rgl20mg／kg组； 孵育 lh，TBST缓冲液洗脱 3次，每次 5rain；BCIP／NBT显 ⑤ Rgl40mg／kg组 ；⑥ 阳性药物对照组。每组 5只大 鼠。 色；扫描 电泳条带，用凝胶分析软件分析 电泳条带强度 。采用 ③～⑤组分别于术前 5天至取材当 日连续腹腔注射人参皂苷 ~-Actin作为内参照。扫描 电泳条带，用凝胶分析软件分析各 Rgl；⑥组注射尼莫地平注射液 ，①、②组分别注射 l_5ml等 蛋白目的条带的吸光度。根据 目的条带与内参照条带吸光度 渗生理盐水 ，均为 1次 ／d。 的比值表示待测蛋 白含量。 1．2 主要实验药品 1．5 统计学分析 人参皂苷Rgl(纯度9