人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226和U266对TRAIL耐药的机制探讨.pdfVIP

出壅医药垫!Q生笠三Q鲞箜兰!塑 人多发性骨髓瘤细胞株RPMl8226和 U266对TRAIL耐药的机制探讨 浦践一，魏晓璇。沈扬 (华北煤炭医学院附属医院，河北唐山063000) 摘要：目的探讨人多发性骨髓瘤细胞株RPMl8226和U266对TRAjL耐药的机制。方法将人多发性骨髓 瘤细胞株RPMl8226及U266进行培养、传代，分别加入终质量浓度为o．5、1．o、2．o、5．O、10．Op∥IIll的TRAIL分别 作用12、24和48h后收集细胞。通过倒置显微镜观察删L作用前后RPMl8226及u266细胞形态学变化检测细 胞凋亡情况，通过半定量RT—PCR方法检测耵ⅢL受体mRNA水平。结果随着药物浓度的增加及药物作用时间 的延长，RPMl8226细胞凋亡的数量增加，而u266细胞形态并无明显变化。TRAIL受体DR5mRNA在RPMl8226 中的表达水平高于U266，而DcRl 扰凋亡信号传导，从而对TRAIL耐药。 关键词：肿瘤坏死因子TRAIL；人多发性骨髓瘤细胞株；耐药 中图分类号：R733．3文献标志码：B 文章编号：1002-266x(2010)31蜘63也 TRAIL是肿瘤坏死因子(TNF)家族中的重要一1．2．2细胞形态学观察倒置显微镜下观察不同 员，其生物学特点是仅诱导多种组织来源的肿瘤细 胞、转化细胞或病毒感染细胞凋亡，而对正常组织细 态学变化。 1．2．3 胞没有影响。目前已发现5种TRAIL受体，分别是 TRAIL受体mRNA表达检测收集TRAIL 死亡受体DR4、DR5，诱捕受体DcRl、DcR2和可溶 细胞总RNA，电泳鉴定RNA并定量，逆转录合成 性受体Ose叩rotegerin(OPG)。DR4和DR5均含有 “死亡结构域”，可通过死亡受体信号传导途径诱导 凋亡的发生；而DcRl和DcR2均缺乏细胞内信号传经2％琼脂糖凝胶电泳50 导系统，不能将凋亡信号向下传递，但均能竞争性与 agerl200)上进行扫描，相应位置上显示有条带者， TRAIL结合，干扰凋亡信号的传导。2008年12月为有目的基因的表达。各基因mRNA的相对表达 mR— 一2009年12月，我们观察了TRAIL对RPMl8226水平以其各自的灰度值除以相同标本B-actin 和U266的形态及其TRAIL受体表达水平的影响，NA的灰度值表示。 探讨TRAIL对人多发性骨髓瘤的作用机制及细胞1．3统计学方法采用SPSS10．O统计软件。计 对其的耐药机制。 量数据以茁±s表示。对资料进行正态性检验和方 1材料与方法 差齐性检验。采用ANOVA方差分析，方差齐组间 1．1 材料啊01、逆转录反应体系及总RNA提纯 两两比较采用g检验，方差不齐组间两两比较采用f 试剂盒(北京赛百盛)；琼脂糖及绿色体系(Pm—检验。P≤0．05为差异有统计学意义。 mega，usA)；人多发性骨髓瘤细胞株fuPMl8226及2结果 U266，用含20％胎牛血清RPMll640培养基培养，2．1细胞形态学变化倒置相差显微镜观察RP— 在37℃、5％cO：、饱和湿度环境孵育。 1．2实验方法 细胞团样，胞膜完整无破损，胞质透明无颗粒。经 1．2．1 TRAIL TRAIL干预取对数生长期的RPMl8226 5“∥ml处理后24h可以见到典型的凋亡形 细胞及u266细胞，调整细胞密度为2×105／ml，接态学改变，表现为部分细胞悬浮，折光性减低，细胞 种于24孔培养板，分别加入终浓度为0．5、1．O、 体积变小、变形。随着药物浓度的增加及药物作用 2．0、5．0、10．O斗∥ml的TRAIL，作用24h后收集细