耐多药结核分枝杆菌双组份系统反应调节子表达的研究.pdfVIP

耐多药结核分枝杆菌双组份系统反应调节子 表达的研究 周磊 马越云 刘家云 黄芳 苏明权 杨柳 郝晓柯 目的检测MTB耐 多药菌株和敏感菌株 的TCS反应调节子的表达水平 ，以筛选 出与 MTB耐药相关的TCS。方法将7H9肉汤培养至对数生长期的MTB进行总RNA的提取和纯度鉴 定；然后进行反转录，利用SYBRGreenI实时荧光定量PCR方法检测MTB的TCS反应调节子表达水 平，以筛查出在耐多药菌株和敏感株中差异表达的TCS反应调节子。检测1NH、SM和LFA压力下这 些差异表达的TCS反应调节子的表达水平。结果 与敏感菌株相比，在耐多药菌株中Rv0491、 Rv3133c、Rv3143和Rv3246c分别上调表达1.03、7.11、3.48和1.37倍，差异有统计学意义 （t或t= 5.623、-4.196、-3.559、-3.016,P＜0.01）。而其余反应调节子的表达在耐多药菌株和敏感菌株 之间差异均无统计学意义。在抗生素压力下，Rv1027c、Rv3246c和Rv3143的表达明显升高，Rv0491 和Rv3133c则变化不明显。结论Rv3246c和Rv3143的差异表达可能是MTB耐药的重要机制之一， 可为新型抗结核药物的研制提供理论依据。 分枝杆菌，结核；抗药性，细菌；聚合酶链反应；信号传导 Theexpressionoftwo-componentsystemresponseregulatorinmultidrug-resistantMycobacterium tuberculosis ZHOULei,MA Yue-yun,LIUJia-yun, HUANGFang,SUMing-quan,YANGLiu, HAOXiao-ke DepartmentofClinicalLaboratory,XijingHospital,theFourthMilitaryMedicalUniversity,Xian 710032,China Objective Toscreenoutthetwo-componentsystemassociatedwithdrugresistanceof Mycobacteriumtuberculosisbydetectingthedifferentialexpressionoftwo-componentsystemregulatorgenes betweenmultidrugresistantMycobacteriumtuberculosisstrainsanddrugsensitivestrains.Methods Total RNAofMTBwasextractedfromculturedMTBduringthelogarithmicphaseinthe7H9brookmedium,and thenitspuritywasidentified.Reversetranscriptionwasfurthercompleted.TheexpressinglevelsofTCS responseregulatorswerequantifiedusingSYBRGreenIqRT-PCR,whichaimedatfindingthedifferential expressionsbetweenmultidrugresistantstrainsandsensitivestrains.Finally,allofdifferentiallyexpressed TCSwerescreenedoutunderthestressofINH,SMandLFA.Results Comparedwithsensitivestrains, multidrugresistantstrainsofRv0491,Rv3133c,Rv3143andRv3246cwereup-regulated1.03,7.11,3.48 and1.37folds,respectively(t/t=5.623,-4.196,-3.559and-3.016,respectively,P＜0.01).The expressinglevelofotherregulatorshadnostatisticalsignificancebetweenmuhidrugresistantstrainsanddrug sensitivestrains.Undertheantibioticpressure,theexpressionofRv1027c,Rv3246candRv3143showed significantchangescomparedwithnoantibi