生物素-亲和素放大酶联免疫吸附法测定二乙基磷酸酯类有机磷农药.pdfVIP

HUAXUE)研究报告 第39卷 分析化学(FENXI 第3期 ChineseJournalof 346～350 2011年3月 AnalyticalChemistry 1．00346 OOl：10．3724／SP．J．1096．201 生物素一亲和素放大酶联免疫吸附法测定 二乙基磷酸酯类有机磷农药 王磊1 张丽杰1 吕伟1 韩世鹤1’2 张付凯1 潘家荣“ (中国农业科学院农产品加工研究所，农业部农产品加工与质量控制重点实验室，北京100193) 2(陕西师范大学食品工程与营养科学学院，西安710062) 摘 要基于生物素和亲和紊之间发生特异性反应，形成多酶系统，建立了二乙基磷酸酯类有机磷农药的竞 争酶联免疫分析技术和生物素一亲和素放大酶联免疫分析技术。在优化条件下，二乙基磷酸酯类有机磷农药 10-1～lX 浓度在lX o．9889)，半抑制浓度和检出限分别为34 p舡和0．0248¨班，与间接竞争酶联免疫分析方法相比，在交叉反应 率基本不变的情况下，检测灵敏度和检测范围都得到显著提高，实际样品的加标回收率为70．1％～117．8％， 基本满足痕量物质分析的要求。 关键词农药；二乙基磷酸酯类有机磷；生物素一亲和素放大酶联免疫吸附法 1 引 言 有机磷农药作为一类高效、广谱的杀虫剂、除草剂等已被广泛用于农业生产中长达60余年”l，但其 不合理使用与滥用所导致的环境及农产品中残留过高已严重危及人的健康安全，同时也严重阻碍着我 国的农产品出口贸易。因此，建立可靠、灵敏、快速、简便的有机磷农药残留分析方法，对严格控制农药 残留、保护生态环境和保障人类健康有着重要意义。与色谱技术相比，免疫学方法具有低成本、高通量、 linked 方便携带等优点∞】，但间接竞争酶联免疫吸附分析法(Indirectcompetitiveenzyme 时检测多种农药残留，成为农产品质量安全领域的高新技术，也是目前的研发热点和发展趋势。文献 【4]介绍了敌敌畏、乙酰甲胺磷、乐果等高毒有机磷农药残留免疫分析方法。李永祥等¨1合成了系列半抗 原及抗原，制备了4种宽谱特异性抗体，检测了二甲氧基硫代磷酸酯类农药。刘贤进等№1利用通用结构 抗体的方法，制备了二乙基磷酸酯类有机磷农药残留的多克隆抗体，建立了针对一类农药残留的酶联免 疫吸附分析方法，但是灵敏度较低。为了提高检测灵敏度，除制备效价高、特异性强的抗体，还可引入信 号放大作用。20世纪70年代后期，利用生物素与亲合素的高亲和力(亲和常数高达1015L／m01)的新型 生物反应信息放大系统在免疫学检测中得到应用川。高翔等胆1以酶联免疫方法为基础，结合生物素一链 linked 霉亲和素系统的放大作用，建立直接竞争生物素链霉亲和素放大酶联免疫(Biotin-Avidinenzyme immunosorbent 药的酶联免疫检测分析方法，为提高有机磷农药残留检测的灵敏度提供了新方法。 2 实验部分 2．1仪器与试剂 MULTISKAN 板(美国Coming公司)。 ．辣根过氧化物酶标记羊抗小鼠二抗(HRP-IgG，北京索莱宝生物科技有限公司)；生物素标记羊抗小鼠 2010—05—27收稿；2010—11—07接受 本文