P-糖蛋白在多药耐药的K562细胞转运苯妥英纳与卡马西平中的作用.pdfVIP

Research PIll,：麟鬻脚吣 www．pibb．ac．on P．糖蛋白在多药耐药的K562细胞转运 苯妥英纳与卡马西平中的作用· 陈英辉1，∞赵永波2)” (’l复旦大学附属金山医院神经内科，上海200540；4上海交通大学附属第一人民医院神经科，上海200080) 摘要研究证实，多药转运体与难治性癫痫耐药机制密切相关，P．糖蛋白在其中起重要作用．主要研究P-糖蛋白拮抗剂维 拉帕米对P．糖蛋白过表达的K562细胞耐药性及细胞内苯妥英纳与卡马西平浓度的影响．首先建立了P．糖蛋白高表达的 并观察给予维拉帕米后，耐药细胞内抗癫痫药物的浓度变化．结果发现，苯妥英纳和卡马西平对K562／Dox细胞株的半数抑 达的P．糖蛋白参与了细胞的药物转运。在难治性癫痫的耐药机制中扮演重要角色． 关键词难治性癫痫，P-糖蛋白，维拉帕米，多药耐药 学科分类号R742．1，R971．6 癫痫是一种常见的神经系统疾病．大约20％～ 30％的癫痫患者经过现有的药物治疗并不能够减轻 发作的频率和强度，被称为难治性癫痫．近年研究 学科学院血液研究所)． 发现难治性癫痫患者脑内，特别是血脑屏障部位， 1．2耐药细胞株KS62／Dox的诱导 高度表达多药转运体，引起了人们的广泛兴趣． 人红白血病细胞株I(562常规培养于 P．糖蛋白口．glycoprotein，PGP)作为一种多药转运 体，为跨膜糖蛋白，属于ATP结合的蛋白质超家 素100U／ml和链霉素100 mg／L)．取对数生长期 族．这种结构具有能量依赖性的功能，能将药物和 K562细胞，加入阿霉素至10 mg／L，37℃放置 其他疏水性化合物主动转运出细胞．由此引起的细 2h，离心取细胞，培养于完全RPMI．1640液内． 胞内药物积聚减少可能参与了难治性癫痫的耐药机 待细胞恢复生长后，复用Dox处理，直至细胞获 制．为此，我们通过比较PGP高表达和PGP表达得耐药性后，用极限稀释法获得抗药细胞克隆，克 隆细胞维持培养于含0．1 Dox的培养液中． 阴性的细胞系对经典抗癫痫药物(antiepileptic mg／L 耐药细胞系在无药培养7--28天时进行检测． drugs，AEDs)苯妥英纳(phen”oin，PHT)、卡马西 1．3细胞耐药性试验(MTT法1 平(carbamazepme，cBz)的摄取及PGP拮抗剂维拉 用MTI法进行细胞耐药性试验，以测得的吸 帕米(verapamil，Ver)对细胞内药物的影响，进一步 了解PGP在难治性癫痫耐药机制中的作用． 光度值对药物浓度的对数作图．按图用加权回归法 求出杀死半数细胞的药物浓度即‰．用下列 1材料与方法 1．1药物与试剂 院开放课题2007资助项目． 阿霉素(doxorubicin，Dox，Sigma公司)，四氮甲 ”通讯联系人． 基唑蓝(MTT，Sigma公司)，卡马西平(Sigma公司)， 苯妥英钠(Si舯a公司)，维拉米(Sigma公司)，收稿日期：20084)4-22，接受日期：2008-07-21 万方数据 ·1426· 生物化学筠生物物理进展Pr