水浴浸提－高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法快速测定水.docVIP

水浴浸提－高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法测定中的甲基汞 余晶晶1,2，杨红霞1，刘崴1，李冰(1，王小如2 1（国家地质实验测试中心，北京 100037）2（国家海洋局第一海洋研究所，青岛 266061） 1 引言 甲基汞是汞形态中最具毒性的，在水生生物体中有很强的富集效应，并可通过食物链富集进入人体，对人类和高等生物产生毒害作用，虽然在环境和生物样品中汞的形态不很复杂, 但由于样品基体的复杂性及汞化合物的毒性，使得样品前处理在整个汞形态分析过程中占有举足轻重的地位。对于生物样品来说，碱消解是一种比较有效的提取方法：在样品中加入25%氢氧化钾/甲醇溶液，振荡过夜，先使用二氯甲烷将目标物萃取至有机相，再使用硫代硫酸钠将目标物萃取至水相，最后用流动相稀释，上机测定，甲基汞的提取率高，但其提取时间长，操作步骤繁琐，要求实验人员具有较高的操作技能。 本实验中通过对碱消解的提取方法加以改进，使用25%氢氧化钾/甲醇溶液为提取液将样品经过水浴浸提2小时后，直接上机测定，大大缩短了处理时间，同时简化了提取步骤。建立的水浴浸提-高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱（HPLC-ICPMS）联用技术测定水产品中甲基汞的方法快速、稳定。 2实验部分 2.1 仪器与试剂7500a型电感耦合等离子体质谱仪Agilent 1100型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）工作参数：射频功率1360 W，Babington雾化器，载气流速1.10 mL/min，采样深度6.4cm，采用时间分辨分析（Time Resolved Analysis）模式。高效液相色谱条件：色谱柱ZORBAX XDB-C18（2.1 mm×50 mm，5 μm），流速0.4 mL/min，进样量20 μL。甲基汞标准溶液（国家标物中心）；甲醇(色谱纯,天津四友生物医学技术公司)；2-巯基乙醇(分析纯, Sigma分装；HCl (Mos级,北京化学试剂研究所)；醋酸氨(分析纯，北京化工厂)；超纯水：去离子水经Milli-Q装置纯化（电阻率18MΩ(cm）。所有标准溶液和样品用Milli-Q纯化水制备。高效液相流动相：0.06mol/L乙酸铵溶液，(=5%（体积分数，下同）的甲醇，(=0.1%的2-巯基乙醇溶液，pH= 6.8。甲基汞工作溶液：将甲基汞标准溶液（71.3±2.7）mg/L（以汞计，甲醇介质，冷冻保存）用流动相稀释配制（现用现配）。25%（质量/体积, m/v）KOH溶液：25g KOH固体溶于100mL甲醇中。角鲨肌肉组织标准物质（DORM-2）、龙虾肝胰腺标准参考物质（TORT-2）（加拿大国家研究中心）；金枪鱼标准物质（GBW10029）（国家标物中心）。 2.2 样品提取称取0.2~0.5g样品于50mL塑料离心管中。加入5 mL (=25%的KOH/甲醇溶液，85℃水浴浸提1.5h，冷却后，甲醇补充体积至5mL。取其中的0.5mL，用流动相稀释至10mL（低含量样品，稀释至5mL），使用浓盐酸调节pH值为4~7之间，0.45 μm膜过滤后，使用HPLC-ICP-MS分析测定。 3 结果与讨论 3.1甲基汞的分离检测使用HPLC-ICPMS对甲基汞标准溶液进行分离检测，峰型对称，色谱保留时间为3.22min。本实验中配制浓度为0.5μg/L 、1μg/L、2μg/L、5μg/L、10μg/L的甲基汞标准溶液，用HPLC-ICP-MS测定标准系列，获得标准工作曲线。以工作曲线上各点的浓度和峰面积为横纵坐标，回归系数为0.9999。 3.2 重现性及检出限取2μg /L的甲基汞标准溶液，连续进样7次，将测得的甲基汞峰面积积分，RSD为1.8%。按照IUPAC的规定，三倍于噪声的响应值所对应的浓度值相当于检出限。本实验根据这一定义，甲基汞的检出限为0.10μg/L。 3.3水浴提取条件实验选用DORM-2标准参考物质，按照2.2中所述的样品提取步骤，设定在不同的水浴温度（75℃、85℃、95℃）和水浴时间（1h、1.5h、2h、2.5h）条件下，进行正交试验，实验设计一组平行样。通过实验确定在85℃水浴浸提1.5h为水浴的最佳条件。 3.4 标准物质中甲基汞的分析和加标回收试验为验证方法的准确性与精密度，分析了加拿大国家研究中心的DORM-2、TORT-2、国家标准物质研究中心金枪鱼标样（GBW10029）甲基汞提取率为84%~89%之间分别为8%、8%和87%。说明运用水浴浸提-HPLC-ICPMS系统测定鱼肉样品中的甲基汞，结果可靠。 3.5 实际样品分析由北京市场上随机购买鱼、虾、贝，将其洗净、搅碎，存放于-20℃冰箱中。使用文中所述方法对其进行分析，测定结果为7.85~50.8μg /kg，而扇贝中的甲基汞含量低于方法检出限。分析结果表明几种