根际促生菌的改良、鉴定及其对玉米生长发育的影响.pdfVIP

科学技术 根际促生菌的改良 鉴定及其对玉米 生长发育的影响 王补全 刘晓东 李 伟 太原市康美瑞科技发展有限公司 山西 太原 030006 【摘 要】本研究利用我公司 (太原市康美瑞科技发展有限公司)筛选得到的能解磷、具有广谱抗茵性能的 KM2、KM19茵株作为实 验菌株，通过鉴定KM2和KM19，发现这两个菌株都不具有 卜氨基环丙烷 卜羧酸(Acc)脱氨酶活性，利用分子生物学手段将ACC脱氨 酶基因导入KM2和KM19，在ACC为惟一氮源的培养基上，KM2和KMt9均能正常生长，表明 4r]获得了ACC脱氨酶活性。生测结果 表明，基因改良后的KM2和KM19菌株较改良前对玉米生长发育有显著的促进作用。 【关键词】玉米 ACC脱氨酶 基因改良 乙 烯 都 是 通 过 1一氨 基 环 丙 烷 一1一羧 酸 盐 - 4。C保存 ：将上述组分一与组分二溶液各取 01m1．再加入 KH2PO4 4Og Na2HPO4 6 0g MgSO4 -7H20 0．2g (1-aminocyclopropane--1-carboxylate．简称 ACC)合成酶途径产 ． ． ， 葡萄糖 生的，其合成路线是：Met—sAM—Acc—ETH，ACC是乙烯合成 2Og葡糖酸2Og柠檬酸 2Og．(NH4)2SO42．0g，H201O00ml。 的直接前体．SAM 降解为 ACC是乙烯合成的限速步骤，受 ACC 121℃灭菌2O分钟。 合成酶的催化。ACC脱氨酶调节高等植物生长发育的进程是通过 3)ADF培养基：将DF液体培养基中所含 (NH4)2SO4替换成 调节乙烯的水平来实现 的。ACC脱氨酶是从土壤的假单孢菌 ACC． ACC不可高温灭菌 使用时先将ACC配成0．5M浓度的 (Pseudomonassp1) 中分离出来的一种可以将ACC分解成为。一【 母液．通过 02 m的细菌滤器灭菌．将母液按 6ml／L的量添 酮丁酸和氨的酶。在ACC为惟一碳源的培养基上筛选菌株，能正常 加入经高温灭菌冷却后的DF液体培养基 (无 (NH4)2S04)。母 生长的菌株中含有ACC脱氨酶Klee等 。自然界中也存在着多种 液于一2O℃保存。 类型的ACC脱氨酶．在植物中尚未发现ACC脱氨酶的存在。可是． 4)DF固体培养基：在 DF液体培养基添加的Bacto-Agar． 在植物的保鲜、花卉的延缓衰老 提高植物的生物量增加对重金 添加浓度为 1．8％。121℃灭菌 2O分钟。 属的吸收量等方面起着非常重要的作用。ACC脱氨酶使用范围广． 5)ADF固体平板 ：将不添加 (NH4)2SO4的DF固体培养基灭 代谢产物不会对植物生长和其它性状产生不利的影响，另外该酶 菌处理后倒在标准尺寸培养皿中．在超净台上冷却 凝 固后 每 在动物体内很快被降解．不存在人们所担心的 安全性”问题．因 皿以3O otol的量涂布 ACC溶液。 此其研究越来越受到人们的重视。 1．2实验方法 促生根际菌具有广泛的应用价值 ．属于根际细菌(PGPR)的 1．2．1利用ACC方法鉴定根 围促生细菌(PGPR)KM2、KM19 微生物体 内大多数含有 ACC脱氨酶 ．通过多种方式影响植物的 的脱氨酶活性。 生长f3～6]，具有 ACC脱氨酶活性的PGPR可以保护植物避免生 把供试菌株分别接种于 ADF培养液 中，进行 ACC脱氨酶 物及非生物的胁迫 ，包括有水胁迫 、重金属、盐碱胁迫及植物病 活性菌株鉴定 (30。C 200rpm培养过夜)。从各ADF培养液中． 原体的侵害等。当ACC脱氨酶活性细菌附着在种子表皮时，能 分别吸取 250 L菌液 涂布于 ADF固体培养基上．在3O℃下． 通过分解 ACC来调节植物内源乙烯的水平 ．来达到调节植物的 培养72h[8]。实验操作中涉及