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DNA
DNA
DDNNAA测序结果判读及常见问题分析
作者：佚名 来源：生物秀 时间：2008-3-6
测序结果的判读
测序结果为.abi格式，可用软件chrosmas打开，本站下载地址：/S
oft/2006/267.htm
一种颜色的峰代表一个碱基，峰的高低表信号的强弱。一个正常的N表示机器没法判读是哪
种碱基，原因是：杂峰的信号高于机器默认的值，机器会认为该处有两个峰，因此不能判断
确定是哪个峰，需要人工判读。以下三种情况会出现N：有杂合子，有杂峰，反应已结束。
原因：测序产物纯化不够
注意：染料峰位于序列的前 100碱基以内;酒精峰位于序列的 220 ~ 320碱基之间
产生的原因是样品或毛细管内有灰尘等固体小颗粒
原因：测序反应失败。
解决办法：改进条件，重做反应。注意两个关键因素：引物与模板之间的比例： 3.2 pmol:
200 ng。模板 DNA的纯度和用量： 1.6 ~ 2.0
原因：残余的 Dye太多，纯化不够。有测序反应，但效率低下信号太弱
解决办法：纯化充分。避开引物峰，确定新的分析起点
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