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如何做好定量PCR 的样品前处理工作 如何做好定量PCR 的样品前处理工作 基因有限公司 基因有限公司 市场部 市场部 样品前处理 样品前处理 定量PCR 的样品前处理就是核酸分离纯化的 定量PCR 的样品前处理就是核酸分离纯化的 工作。 工作。 正确的样品前处理是定量PCR实验获取成功 正确的样品前处理是定量PCR实验获取成功 的保障 的保障 基因有限公司-定量学习班-如何做好样品前处理 2007年10月29 日 第2页 样品前处理的流程 样品前处理的流程 样品采集与保存 样品采集与保存 样品分散 样品分散 样品裂解，释放核酸 样品裂解，释放核酸 核酸纯化/醇沉淀/洗涤 核酸纯化/醇沉淀/洗涤 核酸溶解保存 核酸溶解保存 核酸质量检测 核酸质量检测 基因有限公司-定量学习班-如何做好样品前处理 2007年10月29 日 第3页 杜绝外源的核酸酶的污染 杜绝外源的核酸酶的污染 RNA抽提纯化 特别针对RNA抽提 特别针对RNA抽提 外源的RNase来源众多 外源的RNase来源众多 手指：戴手套。 手指：戴手套。 容器、枪头：灭活RNase ，DEPC处理，高温灭菌。 容器、枪头：灭活RNase ，DEPC处理，高温灭菌。 移液器：有条件的话高温灭菌；至少以75%乙醇擦拭枪 移液器：有条件的话高温灭菌；至少以75%乙醇擦拭枪 身，推荐RNAzap ；专枪专用。 身，推荐RNAzap ；专枪专用。 实验台面：至少以75%乙醇擦拭干净，推荐RNAzap 。 实验台面：至少以75%乙醇擦拭干净，推荐RNAzap 。 水和缓冲液：应该使用DEPC水或者无酶水。 水和缓冲液：应该使用DEPC水或者无酶水。 基因有限公司-定量学习班-如何做好样品前处理 2007年10月29 日 第4页 样品采集与保存 样品采集与保存 注意事项 绝大部分情况下，使用新鲜样品可以获得最好的 绝大部分情况下，使用新鲜样品可以获得最好的 结果。 结果。 如果因为某些原因，样品必须先行保存： 如果因为某些原因，样品必须先行保存： 不同的样品采取不同的保存方法 不同的样品采取不同的保存方法 对于用于抽提RNA 的样品，可用RNAlater保存 对于用于抽提RNA 的样品，可用RNAlater保存 将样品分割后保存，避免反复冻融； 将样品分割后保存，避免反复冻融； 如果实验室不具备合适的保存条件，将样品先裂解后 如果实验室不具备合适的保存条件，将样品先裂解后 再保存 再保存 了解样品的特性 了解样品的特性 核酸含量、酶含量、特殊杂质含量 核酸含量、酶含量、特殊杂质含量 基因有限公司-定量学习班-如何做好样品前处理 2007年10月29 日 第5页 样品采集与保存 样品采集与保存 动物组织中ＲＮＡ的估算 动物组织中ＲＮＡ的估算 基因有限公司-定量学习班-如何做好样品前处理 2007年10月29 日 第6页 基因有限公司-定量学习班-如何做好样品前处理 2007年10月29 日 第7页 样品分散 样品分散