ts-SV40LT抗原转基因干细胞增殖活性的温度调控机制分析.pdfVIP

天津医药2012年3月第40卷第 3期 247 doi：10．39690．issn．0253—9896．2012．03．017 实验研究 ts—SV40LT抗原转基因干细胞增殖活性的温度调控机制分析 刘洪 良 刘晓智 刘振林 姜忠敏 盛 凤 李 罡 摘要 目的：研究温度敏感性猿猴病毒40大T抗原 (ts—SV4OLT)转基因干细胞增殖活性的温度调控机制。方法： 用含ts—SV40LT抗原的表达质粒转染脐带间充质干细胞(UCMSCs)，将其分别置于33℃和37℃培养，细胞免疫荧光方 法检测增殖细胞核抗原(PCNA)活性，PCR—ELISA端粒酶检测法检测端粒酶活性及细胞周期 ，WesternBlot法检测周 期素(Cyclin)D1、CyclinE、周期素依赖性蛋白激酶 (CDK)2、CDK4、CDK6、P16和P21的蛋白表达情况 ，免疫荧光方法检 测巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果：细胞在33℃时培养24、 48、72h的PCNA阳性表达百分率均高于37℃时，差异有统计学意义(P0．01)。转染tsSV40LT抗原基因后，细胞在 33℃培养箱时的端粒酶活性和PIx值高于37 时，差异有统计学意义(P0．01)。33℃时的CyclinD1、CyclinE、 CDK2、CDK4、CDK6及Nestin表达量高于37℃时，P16、P21、NSE和GFAP的表达量低于37℃时 ，差异均有统计学意义 (P0．05或P0．01)。结论：通过tsSV40LT抗原基因的有效转染可实现干细胞在不同温度环境下的增殖调控。 关键词 间质干细胞 脐带 细胞增殖 转基因 增殖细胞核抗原 低温 周期素依赖激酶抑制剂p16 周期 素依赖激酶抑制剂p21 细胞周期蛋白质依赖激酶类 磷酸丙酮酸水合酶 神经胶质原纤维酸性蛋白质 TheMechanism AnalysisofTemperatureRegulatingProliferationof Stem CellsModifiedbytsSV40LTGene LIUHongliang，LIUXiaozhi，L1UZhenlin，JIANGZhongmin，SHENGFeng，LIGang DepartmentofNeurosurgery,TheFfithCentralHospitalofTianfin,Tianjin300162，China Abstract Objective：Tostudythemechanism oftemperaturecontrolinproliferationofstem ceilsmodifiedby tsSV40LTgenetemperature—sensitivesimianvirus4OlargeT-antigenftsSV40I )．Methods：Aftertransfectingplasmidcon- tainingtsSV40LTintoumbilicalcordmesenchymalstemcells(UCMSCs)．TheseUCMSCsmodifiedbytsSV40LTwerecul- turedin33oCand37oCincubatorsrespectively．Theproliferatingcellnuclearantigen(PCNA)activity，telomeraseactivation， cellcycle，cellcycleregulatingproteins，includingCyclinD1，CyclinE，CDK2，CDK4，CDK6，P16，P21，nestin，neuronespe— cificenolase(NSE)andglialfibrillaryacidicprotein(GFAP)weredetectedrespectively．Results：Whenculturedat33℃for 24，