Trizol RNA提取法在雪貂组织的流感病毒H3N2定量PCR检测中优于RNeasy mini kit（Qiagen）柱子法.pdfVIP

2012年 2月 中国比较 医学杂志 February，2012 第22卷 第2期 CHINESEJOURNALOFCOMPARATIVE MEDICINE Vol_22 NO．2 TrizolRNA提取法在雪貂组织的流感病毒 H3N2 定量 PCR检测中优于 RNeasyminikit (Qiagen)柱子法 占玲俊 ，鲍琳琳，李枫棣 ，吕 琦，许黎黎，秦 J／ (1．中国医学科学院医学实验动物研究所 ，卫生部人类疾病 比较医学重点实验室， 国家中医药管理局人类疾病动物模 型三级实验室 ，北京 100021) 【摘要】 目的 比较 RNeasyminikit(Qiagen)柱子法和Trizol法提取 RNA在雪貂肺和肠组织H3N2SYBR GreenPCR定量 中的去干扰作用 ，从而找到适合该定量体系的RNA提取方法 。方法 比较 Trizol法 ，RNeasymini kit柱子法 ，改 良RNeasyminikit柱子法 1和改 良RNeasyminikit柱子法2提取肺肠组织 RNA的质量 ，RNA逆转录 成 cDNA后 ，利用 SYBRGreenPCR方法检测样 品中H3N2的载量 ，比较产物 的特异性 ，综合评价 RNA提取方法 。 结果 4种方法提取的肺和肠组织的RNA质量不相 同，紫外分光光度仪测得 RNeasyminikit柱子法提取的RNA 的A260／280低于 1．8，其余 3种方法的A260／280在 1．8～2．1之间，A260／230只有Trizol法能达到2．0左右，其 余 3种方法均远低于2．0。电泳可见 Trizol法提取的RNA有 3条带：28S、18S和5S，而 RNeasyminikit柱子法 的 RNA除了有 28s、18s外，还有基 因组 DNA，改 良RNeasyminikit柱子法 1和 2提取的RNA只有 28s和 18S带。 RNA逆转录后进行荧光定量 PCR，从溶解 曲线看 ，不论是鼻 甲刮取物还是肺肠组织的样 品模板 ，4种方法获得 的样 品与标准 品均为单一峰溶解 曲线峰，并且波峰位置重叠 。而鼻 甲刮取物定量的产物跑琼脂糖凝胶 电泳均为单一的 特异性条带，而肺肠组织的产物电泳发现 ：Trizol法获得的模板定量产物与标准品一致 ，为单一的特异性条带，而其 它 3种方法获得的模板则均有非特异性条带。结论 鼻甲刮取物的病毒定量选用 RNeasyminikit柱子法提取定量 结果与 Trizo!法一样可靠 ，说明对于简单样品该体系及 引物非常适用 ，结果可信。对于组织样 品肺和肠 ，Trizol法 获得 的样 品定量结果 比其它 3种方法可靠 。 【关键词】 雪貂；H3N2；RNA提取；SYBRGreen荧光定量PCR 【中图分类号】R373；R33 【文献标识码】A 【文章编号】1671—7856(2012)02-0022-06 doi：10．3969／j．issn．1671．7856．2012．02．006 TrizolM ethodforRNA Isolation from FerretTissuesisBetterThan RNeasyMiniKit(Qiagen)ofrDiagnosisofInfluenza VirusH3N2Infection ZHANLing—jun，BAOLin—lin，LIFeng—di，LVQi，XULi—li，QINChuan (1．KeyLaboratoryofHumanDiseasesComparativeMedicine，MinistryofHealth；InstituteofMedical Laboratory AnimalScience，ChineseAcademyofMedicalScienc