pri-miR-21重组腺病毒载体构建及其对TLR4基因调控的研究.pdfVIP

ISSN1007—8738细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmuno1)2012，28(2 l53 · 论著 · 文章编号：1007—8738(2012)02—0153—04 pri-miR-21重组腺病毒载体构建及其对 TLR4基因调控的研究 赵 婧 ，徐广贤 一，贾 伟 ，董 辉 ，张一琳 ，赵志军 ，魏 军 (宁夏医科大学：检验学院，z总医院医学实 验中心，宁夏 银川 750004；宁夏大学 西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室 ，宁夏 银川750021) Constructi0n 0farecombinedadenovi． [摘 要] 目的：构建能高效表达成熟 miR-21小分子的腺病 毒载体，探讨其对TLR4基因的靶向调控关系。方法：以正常 rus vector carrying pri·miR-21 gene 小鼠基因组DNA为模板，PCR扩增pri-miR-21基因，克隆至 andresearch onit’stargetgeneTLR4 穿梭载体pAdTrack—CMV中经PCR、酶切及基因测序分析正 确无误后，与pAdEasy-1腺病毒骨架质粒进行同源重组，并利 ZHAO ring ，XU Guang—xictrt一，JIA Wei，DONG 用293A细胞，包装成pri—miR-21重组腺病毒感染HeLa细胞， Hui，ZHANGYi．1in，ZHAOZhi-jun，WEIJun 通过Westernblot检测TLR4的蛋白表达水平，验证miR一21与 InstituteofLaboratoryMedicine； MedicalExperimentalCenter， TLR4靶 向调控的关系。结果：经 PCR、酶切、测序及GFP表 GeneralHospital，NingxiaMedicalUniversity，Yinchuan750004； 达证实，成功构建携带pri-miR-21基因的重组腺病毒载体并 KeyLaboratoryofMinistryofEducationforProtectionandUtili． 制备出高滴度重组病毒。Westernblot证实，miR-21可抑制 zationofSpecialBiological ResourcesinWesternChina，Ningxia TLR4蛋白的表达。结论：所制备的小鼠pri—miR-21重组腺 University，Yinchnan750021，China 病毒，可以高效表达成熟 miR一21小分子，能够抑制靶基因 TLR4的表达。 lAbstractI AIM：Tooonstructtherecombinedadenovi． [关键词】pri—miR．21；重组腺病毒载体；TLR4基因；靶向调控 rusvectorcarryingpri-miR-21gene，whichcanexpressma— [中图分类号]R392．1 [文献标识码]A turemiR-21efficiently，and tostudythe interactionofmiR- 21with itstargetgene TLR4．METHODS：Using healthy microRNA(miRNA)是一类长度约为 22nt的非 mouse’sgDNAastemplate，theprimary miR-21codingse— 编码单链小RNA分子，通过与靶基因3非编码区(3 quencewasamplifiedbyPCRandclonedintoashuttlevec- untranslatedregions，3一UTR)结合，特异性 的引起 torpAdTrack-CM