紫花苜蓿原生质体培育与植株再生.pdfVIP

维普资讯 第 2卷 第 l期 草 地 学 报 ]994 正 Vo1．2 No．1 ACTA AGRESTIA SINCA 1994 ㈡1 r 紫花苜蓿原生质体培养与植株再生 舒文华 耿华珠 孙勇如 Z／ ／， (中国农科 面面 京．100094)(中国科事豌趸军 北京，1o01o1) 摘要 ：由和田苜蓿和单选苜蓿叶内分离原生质体，采用改 良的KaP和 MS培养基进行液 体浅层培养 原生质体经一次分裂 ，二次分裂和多次分裂 ，形成小细胞团，并很快长成小斑伤组 织。斑伤组织在MS分化培养基上增殖并分化，产生小植株 ，经 MS无激素培养基生根形成完 整 的再生植株 。 关蕾词：垄堕堕；．：￡ 墨皇璺竺苎鲞 1 前言 紫花苜蓿 (MedicagosativaL )是重要的牧草之一，具有高产优质的特点，被誉为 “牧 草之王”，苜蓿属 内有 60余个种 ，具有丰富的遗传资源 。一般野生苜蓿在抗逆性、适应性等 方面均优于栽培的紫花苜蓿 ，如果将其优 良性状转到后者 ，就能进一步扩大紫花苜蓿的种植 范围，提高其产草量，更好地为生产服务。但常规的有性杂交往往得不到种子或杂种不育，存 在着亲本不亲和现象。生物技术的发展促进了远缘间遗传物质的重组研究，细胞融合是解决 亲本不亲和的有效手段之一 (C-ilmour，D．M．1987； lmour，D．M．1989．)。原生质体是去掉 细胞壁的细胞 ，采用化学方法或电融合，可将不同来源的原生质体融合到一起 ，经过进一步 选择培养，可形成杂种细胞 ，最后得到杂种后代 。因此 ，有必要开展苜蓿原生质体培养的研 究。 早在 70年代末 ，K．N．Kao等就利用紫花苜蓿叶片分离原生质体并再生植株 (K．N． Kao，1980)，随后有许多科学家，先后从苜蓿子叶、根和悬浮细胞系等分离原生质体并再生 植株 (尹光初等，1990)。1989年，Gilmour，D．M．等将 M．sativa的原生质体分 别和 ． borealis、M．falcata、M．quasifalcata等的原生质体融合 ，并获得愈伤组织 (D．M．Gilmour， 1987，1989)。中国的苜蓿原生质体培养工作开展较晚 。1982年，吕德阳和许智宏在英国利用 KP培养基 ，分别得到苜蓿子叶和根原生质体的再生植株，所用材料均为外国品种 (D．Y． Lu，1983．z．H．Xu，1982)。1990年，黄绍兴利用 KP培养基得到保定苜蓿子叶原生质体的 再生植株，这是 目前利用 中国苜蓿品种成功地进行原生质体培养 的唯一报道 (黄绍兴 ， 1990)，但尚无苜蓿原生质体融合的报道。本试验是 中国苜蓿材料进行原生质体培养的研 究，旨在为苜蓿原生质体融合和培育新品种打下基础 2 材料和方法 2．1 植物材料 选用和田苜蓿和单选苜蓿，种子由中国农科院畜牧所繁殖。1991年 10月7 日将上述两材料的种子分别播种于花盆中，置于 自然光照下，温度 20~22℃。一个月后，待 植株长到 15厘米左右，取顶部鲜绿色长约 1厘米左右的叶片，用来分离原生质体 。 2．2 方法 2．2．1 原生质体游离 将 叶片用70 酒精浸泡3～5秒．，立刻用无菌水冲洗2遍 ，置于 维普资讯 第 l期 舒文华等 ： 紫花苜蓿原生质体培养与植株再生 ·41 · 0．1 升汞 中消毒 15分钟．再用无菌水冲洗 衰 1 CPW溶液组成 4～5遍 。剥去叶片下表皮 ，置于酶液 中酶解 Table1 Amountandcompound CPW solution 所用酶液组成为 ：R一10纤维素酶 (Cellulase， Onozuka R一10) 2 ，R—l0 果 胶 酶