血浆脂蛋白及代谢紊乱.pptVIP

临床实验室常用血清脂质测定 血清总脂质测定 血清总胆固醇测定 血清甘油三酯测定 血清脂蛋白胆固醇测定 载脂蛋白测定 血清脂蛋白电泳 血清游离脂肪酸测定 血清总脂质测定 血清总脂质包括：甘油三酯、胆固醇及胆固醇酯、磷脂 血清总脂一般随年龄增加而增加，40岁以上显著增加，65~70岁反而降低。 测定方法：脂质抽提法和直接测定法 脂质抽提法：血清脂质抽提入有机溶液后，蒸发 干固，除去有机溶液，加热氧化，显 色测定。 直接测定法：加浓硫酸入血清加热，冷却后，加 试剂显色。 血清总胆固醇测定 血清总胆固醇包括：游离胆固醇FC 胆固醇酯CE FC占30% ，CE占70%；血清胆固醇分布在LDL最多，其次是 HDL，VLDL、CM最少。 测定方法：化学法和酶法 化学法测血清总胆固醇 一般包括四步：抽提、皂化、纯化、显色 显色剂：醋酸-醋酐-硫酸、高铁硫酸。 L-B反应：胆固醇在硫酸、醋酐溶液中显绿色，醋酸-醋酐是胆固醇的溶剂和脱水剂，浓硫酸既是脱水剂又是氧化剂，生成的绿色产物主要是胆烷五烯磺酸。 Zak反应：硫酸、醋酸和Fe3+ 等与胆固醇生成紫红色化合物。 ALBK法：用正己烷抽提， L-B反应显色，是公认的参考方法。 酶法测定血清总胆固醇 原理：胆固醇酯酶（CEH）水解胆固醇酯成胆固醇和脂肪酸，胆固醇与氧在胆固醇氧化酶（COD）作用下氧化生成?4-胆淄烯酮和H2O2， H2O2在过氧化物酶（POD）催化下与4-氨基安替比林和酚生成红色醌类化合物，在500nm比色，吸光度大小与胆固醇含量成正比。 试剂：三种酶CEH、 COD和 POD， 4-氨基安替比林和酚，PH恒定缓冲液，胆酸钠、表面活性剂、稳定剂。 胆酸钠的作用是提高胆固醇酯酶活性 表面活性剂是促进胆固醇从脂蛋白中释放出来。 方法评价：灵敏度、准确度、精密度好，线性范 围宽。 缺点： 胆固醇酯酶水解胆固醇酯不完全，不能用纯的胆固醇结晶配制的有机溶液为标准液，须用准确定值血清为标准液；表面活性剂如吐温-40干扰胆固醇酯酶的作用，聚乙烯醇6000又可使结果提高1-2%；Trinder反应缺陷如尿酸、胆红素、维C、谷胱甘肽等干扰。 血清甘油三酯测定 测定方法：化学法和酶法 化学法一般包括四步：抽提、皂化、氧化、显色 用正壬烷、异丙醇和稀硫酸混合溶剂选择性抽提甘油三酯，甘油三酯皂化水解成甘油，甘油被氧化成甲醛和甲酸，甲醛愈显色剂呈色。 酶法：磷酸甘油氧化酶法（应用普遍） 乳酸脱氢酶法 甘油氧化酶法 目前甘油三酯测定尚无公认的参考方法。 血清甘油三酯测定(磷酸甘油氧化酶法) 原理： 脂蛋白脂肪酶（LPL）使血清甘油三酯水解成甘油和脂肪酸，甘油激酶（GK）通过消耗ATP使甘油磷酸化成磷酸甘油，磷酸甘油氧化酶（GPO）氧化磷酸甘油产生H2O2，最后以Trinder反应显色， 500nm吸光度与血清甘油三酯含量成正比。 注意： 此法测定结果中包括血清中游离甘油，需加做一分不含LPL的酶试剂测游离甘油作为空白值。 血清甘油三酯测定（乳酸脱氢酶法） 原理：脂蛋白脂肪酶（LPL）使血清甘油三酯水解成甘油和脂肪酸，甘油激酶（GK）通过消耗ATP使甘油磷酸化成磷酸甘油和ADP， ADP和磷酸烯醇式丙酮酸反应生成丙酮酸，丙酮酸在乳酸脱氢酶作用下还原成乳酸，由于消耗NADH，故利用NADH在340nm吸光度降低来测定甘油三酯浓度。 注意：此法测定结果中包括血清中游离甘油和丙酮酸，需做试剂空白和标本空白。 血清甘油三酯测定（甘油氧化酶法） 原理： 第一步反应：游离甘油在甘油氧化酶作用下产生H2O2， H2O2在过氧化物酶（POD）催化下与EMAE生成无色物质。 EMAE是N-乙酰-N-（3-甲苯）-N-乙酰乙二胺，其作用和酚相似，其灵敏度比酚高。 第二步反应：脂蛋白脂肪酶（LPL）使血清甘油三酯水解成甘油和脂肪酸，甘油在甘油氧化酶作用下产生H2O2， H2O2在过氧化物酶（POD）催化下与4-氨基安替比林和EMAE生成有色化合物。 血清脂蛋白测定 血浆脂蛋白电泳 高密度脂蛋白胆固醇测定（HDL-C） 低密度脂蛋白胆固醇测定（LDL-C） Lp(a)测定和Lp(a)-C测定 血清脂蛋白电泳 电泳支持物：醋酸纤维素薄膜、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶，以琼脂糖凝胶常用。 脂蛋白电泳分析分：预染法、电泳后染色