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本科毕业论文（设计）手册 ( 届) 题 目： 重组融合蛋白TAT-HA-aFGF27-154 的表达、纯化与鉴定 学 院： 专 业： 药学 学 号： 姓 名： 指导老师： 职称： 合作老师： 职称： 目 录 中文摘要…………………………………………………………………………………5 外文摘要…………………………………………………………………………………6 引言……………………………………………………………………………………7 1材料……………………………………………………………………………7 1.1菌种……………………………………………………………………………7 1.2试剂………………………………………………………………………………7 1.2.1 蛋白表达纯化试剂…………………………………………………………7 1.2.2 常用溶液配制………………………………………………………………8 1.2.3 蛋白电泳相关溶液 ………………………………………………………8 1.2.4 蛋白纯化相关溶液 ………………………………………………………9 1.2.5 蛋白印迹技术相关溶液 …………………………………………………9 1.2.6 主要仪器设备………………………………………………………………9 2.实验步骤 ……………………………………………………………………………10 2.1 融合蛋白的小批量发酵…………………………………………………………10 2.2 融合蛋白的纯化 ………………………………………………………………11 2.3 融合蛋白的鉴定 ………………………………………………………………11 3.实验结果 ……………………………………………………………………………12 3.1 融合蛋白的小批量发酵…………………………………………………………12 3.2 融合蛋白表达形式的确定………………………………………………………12 3.3 融合蛋白的纯化…………………………………………………………………13 3.4 融合蛋白的鉴定…………………………………………………………………13 4．讨论………………………………………………………………………………13 参考文献……………………………………………………………………………14 致谢……………………………………………………………………………………16 重组融合蛋白TAT-HA-aFGF27-154的表达、纯化与鉴定 摘 要：目的：高效表达并纯化穿膜肽（TAT）－非促分裂型重组人酸性成纤维细胞生长因子（aFGF27-154）融合蛋白，为进一步开发基因工程药物提供实验依据。方法：通过IPTG诱导工程菌E.coli BL21(DE3)/pET3c-TAT-HA-aFGF27-154获得可溶性蛋白表达。融合蛋白经CM离子交换层析与肝素亲和层析纯化，获得蛋白纯品。纯化后的蛋白经western blotting印迹反应鉴定。结果：融合蛋白小批量发酵表达后获得菌体26 g，经SDS蛋白电泳分析，融合蛋白主要以可溶性表达为主。表达的蛋白经CM离子交换层析与肝素亲和层析纯化后，得到纯品蛋白1 mg，纯度高于95%。Western blotting印迹反应结果显示，融合蛋白TAT-HA-aFGF27-154在大肠杆菌BL21(DE3)内成功获得表达。结论：成功表达TAT-HA-aFGF27-154融合蛋白并获得蛋白纯品，为进一步的动物实验提供药物。 关键词：穿膜肽；非促分裂酸性成纤维细胞生长因子；蛋白纯化；免疫印迹 On Principle of Honesty and Credit Abstract：Objective: to efficiently express and purify cell penetrating peptide (TAT) and non mitogenic recombinant human acidic fibroblast growth factor (aFGF27-154). Methods: Fusion protein TAT - HA - aFGF27-154 was acquired by the IPTG induction, and