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本科毕业论文（设计）手册 ( 届) 题 目： 重组FGF-21的纯化和活性检测 学 院： 专 业： 药学 学 号： 姓 名： 指导老师： 职称： 合作老师： 职称： 目 录 中文摘要…………………………………………………………………………………6 外文摘要…………………………………………………………………………………7 引言……………………………………………………………………………………8 1．仪器与试剂……………………………………………………………………………9 1.1 仪器……………………………………………………………………9 1.2 常用溶液及缓冲液……………………………………………………………10 1.2.1 DNA电泳相关试剂和溶液蛋白电泳相关溶液1.2.3蛋白免疫印迹相关溶液1.3.3酶、抗体、试剂盒……………………………………………………………13 2．实验方法…………………………………………………………………………14 2.1 hFGF21的纯化…………………………………………………………14 2.1.1 菌体破碎………………………………………………………………14 2.1.2 1次Q Sepharose Fast Flow纯化…………………………………………14 2.1.3 2次Q Sepharose Fast Flow 纯化…………………………………………14 2.1.4 Welch-C18精纯化精纯化的hFGF21蛋白用HPLC(C12)检测其纯度2.4.3 封闭………………………………………………………………………16 2.4.4 一抗孵育…………………………………………………………………16 2.4.5二抗孵育…………………………………………………………………16 2.4.6化学发光法进行曝光，拍照………………………………………………16 2.5 hFGF21调节血糖功能的初步研究2.5.1 Lowery法测hFGF21蛋白浓度2.5.2 鼠源3T3-L1细胞的培养与分化Q Sepharose Fast Flow 纯化结果3.2 Welch-C18精纯化结果3.3纯化的hFGF21纯度的测定………………………………………………………19 3.4目的蛋白hFGF21的分子量测定…………………………………………………20 3.5 Western Blotting鉴定……………………………………………………………20 3.6 hFGF21调节血糖功能的初步研究结果………………………………………20 4．讨论…………………………………………………………………………………22 4.1蛋白纯化与浓缩方法4. 2蛋白质浓度的测定4 .3 hFGF21生物活性检测-21的纯化和活性检测 摘 要：目的：在前期基础实现纯化过程，为后续的机理研究以及开发治疗糖尿病、肥胖病和肝癌的候选药物奠定基础。离子交换柱层析实现纯化过程Western Blotting 检测了hFGF21蛋白的准确性；GOD-POD法初步检测了hFGF21蛋白调节血糖的生物活性使用2次阴离子交换柱纯化了hFGF21蛋白，目的蛋白的纯度都达到85%以上，反相层析柱纯化蛋白纯度提高到95%；利用Western Blotting 检测了hFGF21蛋白的准确性；GOD-POD法初步检测了hFGF21蛋白调节血糖的生物活性GOD-POD法 Recombinant FGF-21 depuration and active detection Abstract: Objective: In the early hFGF21 based realization, and the preliminary purification process for follow-up test their activity, the mechanism of the research and development in the treatment of diabetes, obesity and liver cancer foundation of drug can