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本科毕业论文（设计）手册 ( 届) 题 目：利用胡萝卜悬浮细胞表达aFGF的研究 学 院： 专 业： 药学 学 号： 姓 名： 指导老师： 职称： 合作老师： 职称： 目 录 中文摘要…………………………………………………………………………………6 外文摘要…………………………………………………………………………………7 引言……………………………………………………………………………………8 1. 实验材料与试剂…………………………………………………………………8 1.1 实验材料及试剂………………………………………………………………8 1.1.1 植物材料………………………………………………………………8 1.1.2 菌株和质粒…………………………………………………………8 1.2主要试剂…………………………………………………………………9 1.3 仪器……………………………………………………………………………9 2. 实验方法……………………………………………………………………………10 2.1培养基的配制及培养条件………………………………………………10 2.1.1 有机母液配制…………………………………………………………10 2.1.2植物LB培养基配置方法 ………………………………………………………11 2.1.5 YEB培养基配置方法………………………………………………………11 2.2目的基因的修饰与改造…………………………………………………………11 2.2.1 修饰改造过程中所需引物………………………………………………11 2.2.2第一轮反应体系…………………………………………………………11 2.2.3 第二轮反应体系…………………………………………………………11 2.2.4 第三轮反应体系…………………………………………………………12 2.3 pMHP0-FGF21载体的构建………………………………………………………12 2.4 连接产物转化大肠杆菌感受态细胞…………………………………………12 2.5 质粒DNA提取……………………………………………………………………13 2.6 无菌外植体的获得……………………………………………………………13 2.7 农杆菌介导法的遗传转化……………………………………………………13 2.8 转化体的筛选鉴定……………………………………………………………14 3. 结果…………………………………………………………………………………14 3.1植物表达载体的构建……………………………………………………………14 3.2 胡萝卜悬浮细胞的转化及单克隆筛选………………………………………15 3.3 抗性细胞单克隆培养…………………………………………………………16 3.4 阳性胡萝卜细胞的GUS检测……………………………………………………16 3.5 aFGF蛋白检测……………………………………………………………………17 4. 讨论…………………………………………………………………………………17 5. 总结…………………………………………………………………………………17 参考文献………………………………………………………………………………18 致谢……………………………………………………………………………………aFGF的研究 摘要: 是一来源于中胚层及神经外胚层细胞，有广泛促分裂作用为了降低aFGF的生产成本植物生物反应器的优点aFGF在中的表达进行了探索。aFGF胡萝卜细胞表达aFGF克隆到胡萝卜通过检测及 Western blotting 检测aFGF；胡萝卜悬浮细胞；植物生物反应器 The study on aFGF expression using carrot suspension cells Abstract: Derived from mesoderm and neural ectoderm cells，acid fibroblast growth factor (aFGF) has extensive mitogenic
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