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任务八血清碱性磷酸酶测定
一、原理
二、材料与设备
三、操作过程与方法
四、注意事项
五、临床意义
一、原理
碱性磷酸酶分解磷酸苯二钠，生成游离酚和磷酸，酚在碱性溶液中与4-氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化生成红色醌的衍生物，根据红色深浅测定酶活力的高低。
金氏单位定义：100ml血清在37℃，与基质作用15min，产生lmg酚为1个金氏单位。
二、材料与设备
1.0.1mol/L碳酸盐缓冲液(pHl0.0)：溶解无水碳酸钠6.36g、碳酸氢钠3.36g、4-氨基安替比林1.5g于800ml蒸馏水中，将此溶液转入l000ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，置棕色瓶中贮存。
2.20mmol/L磷酸苯二钠溶液：先将500ml蒸馏水煮沸，迅速加入磷酸苯二钠2.18g(磷酸苯二钠如含2分子结晶水，则应称取2.54g)。冷却后加氯仿2ml，防腐，置冰箱保存。
二、材料与设备
3.铁氰化钾溶液：分别称取铁氰化钾2.5g，硼酸17g，各溶于400ml蒸馏水中，二液混合后，加蒸馏水至1000ml，置棕色瓶中避光保存。
4.酚标准贮存液(1mg/ml)：建议购买商品标准液或自行配制，其方法是将重蒸馏苯酚1.0g于0.1mol/L盐酸中，并稀释至1000ml。
5.酚标准应用液(0.05mg/ml)：酚标准贮存液5ml，加蒸馏水至100ml。只能保存2～3d。
三、操作过程与方法
加入物
0
1
2
3
4
5
酚标准应用液
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
蒸馏水
1.1
0.9
0.7
0.5
0.3
0.1
碳酸盐缓冲液
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
铁氰化钾溶液
3.0
3.0
3.0
3.0
3.0
3.0
相当于金氏单位
0
10
20
30
40
50
三、操作过程与方法
。
1.按上表顺序添加试剂，立即混匀，在波长510nm，以零号管凋零点，读取各管吸光度，并和相应单位绘制校正曲线。
2.标本的测定
取16mm×100mm试管按表12-12进行编号与测定。
三、操作过程与方法
管号
测定管
对照管
血清
0.1
0
碳酸缓冲液
1.0
1.0
37℃水浴5min
基质溶液(预温至37℃)
1.0
1.0
混匀，37℃水浴准确保温15min
铁氰化钾溶液
3.0
3.0
血清
0
0.1
立即混匀，于510nm波长处比色，比色杯光径为1.0cm，用蒸馏水调零，读取各管吸光度。以测定管与对照管吸光度之差值查校正曲线，得酶活性。
四、注意事项
。
（1）铁氰化钾溶液中加人硼酸有稳定显色作用，此液应避光保存，如出现蓝绿色即弃去。
（2）基质中不应含游离酚，如空白管显红色说明磷酸苯二钠已开始分解，应弃去不用。
五、临床意义
1.碱性磷酸酶增加，见于下列情况：
（1）骨内磷酸钙沉着增加的疾病，如骨质软化症、骨瘤、骨折愈合期等。
（2）肝脏疾病，如阻塞性黄疸、急性或慢性肝炎、肝硬化等。
（3）其他如佝偻病、生产瘫痪等也可增加。
2.碱性磷酸酶减少：见于贫血、恶病质、重症慢性肾炎等。
谢谢聆听！
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