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解析手足口病患儿HEV71分离鉴定及VP1基因型：轻重症差异与公共卫生意义

一、引言

1.1研究背景

手足口病（Hand,FootandMouthDisease,HFMD）是一种在全球范围内广泛传播的常见传染病，主要由多种肠道病毒引起，包括肠道病毒71型（HumanEnterovirus71,HEV71）、柯萨奇病毒A16型（CoxsackievirusA16,CVA16）等。自1957年新西兰首次报道手足口病以来，该病在全球范围内迅速传播，引起了广泛关注。手足口病的主要感染对象为5岁以下儿童，占总病例数的90%以上。多数患儿病情较轻，表现为口痛、厌食、低热，手、足、口腔等部位出现小疱疹或小溃疡等症状，一周左右可自愈。然而，少数患儿会引发心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等严重并发症，个别重症患儿病情发展迅速，甚至导致死亡。

在我国，手足口病的流行态势尤为严峻。自2008年安徽阜阳暴发手足口病疫情并引起多例死亡病例后，国家卫生部门高度重视，将其纳入法定报告的丙类传染病。近五年，手足口病发病率连续位于全国法定传染病发病率前几位。2009-2019年，我国手足口病报告发病总体呈波动上升趋势，隔年高发（偶数年份高于奇数年份），每年报告的病例数基本在200万左右。尽管2020-2022年受新冠疫情防控措施影响，发病水平明显降低，但随着新冠疫情防控政策的调整，人群对手足口病预存免疫力降低，专家提示今年手足口病流行强度可能回归到2020年之前。

在众多引发手足口病的肠道病毒中，HEV71型感染具有较高的致死性，是导致手足口病重症和死亡的主要原因之一。近年来，HEV71在全球范围内呈现出持续和快速的流行趋势，成为全球公共卫生领域的重要研究问题。了解HEV71的生物学特性、传播规律以及基因型分布对于手足口病的防控至关重要。其中，VP1基因作为HEV71的重要组成部分，在病毒感染、免疫应答及药物治疗等方面发挥着关键作用。不同的VP1基因型可能具有不同的毒力和传播特性，研究VP1基因型有助于深入了解HEV71的进化和流行规律。

1.2研究目的与意义

本研究旨在从不同病情（轻症和重症）的手足口病患儿中分离鉴定HEV71，并对其VP1基因型进行分析，同时探讨VP1基因中药物结合位点的突变情况。通过这一研究，期望能够更清晰地了解HEV71在不同病情患儿中的分布情况，明确本地区流行的主要VP1基因型，揭示VP1基因型与手足口病病情严重程度之间的潜在关联。这不仅有助于深入认识HEV71的分子流行病学特征和遗传进化规律，为手足口病的监测和预警提供科学依据，还能为手足口病的疫苗研发、临床诊断、治疗以及防控措施的制定提供重要的理论支持。例如，在疫苗研发方面，了解优势流行的VP1基因型有助于开发更具针对性的疫苗；在临床治疗中，掌握药物结合位点的突变情况可以为抗病毒药物的合理使用和研发提供指导。

二、材料与方法

2.1样本采集

2.1.1样本来源

本研究的样本取自[具体地区]多家医院，涵盖了城市和农村地区，以确保样本具有广泛的代表性。样本采集时间为[具体时间范围]，共收集了[X]例手足口病患儿的样本，其中轻症患儿[X]例，重症患儿[X]例。轻症患儿的诊断标准为：仅出现手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹，无发热或仅有低热，无其他系统受累表现。重症患儿的诊断标准依据《手足口病诊疗指南（[具体版本]）》，包括出现神经系统受累症状（如精神差、嗜睡、易惊、头痛、呕吐、肢体抖动、急性弛缓性麻痹等）、呼吸、循环功能障碍等表现。

样本类型包括咽拭子和便样。咽拭子采集使用专用采样棉签，适度用力拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位，应避免触及舌部，迅速将棉签放入装有3-5ml保存液（含5％牛血清维持液或生理盐水，推荐使用维持液）的15ml外螺旋盖采样管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封，以防干燥。便样采集量为5-8g/份，采集后立即放入无菌采便管内。

2.1.2样本数量确定

样本数量的确定参考了相关文献以及本地区手足口病的发病情况。根据以往研究，在进行病毒分离鉴定和基因分型分析时，每组样本量不少于[X]例能够满足统计学分析的要求，且可以较好地反映本地区病毒的流行情况。同时，考虑到本地区手足口病的高发态势，预计在研究期间能够收集到足够数量的病例。为确保研究结果的可靠性和代表性，在样本收集过程中，尽量涵盖不同年龄段、性别以及不同发病时间的患儿。

2.2HEV和HEV71的RT-PCR检测

2.2.1主要实验材料

实验所需的主要试剂包括RNA提取试剂盒（如QiagenRNeasyMini