细胞因子与细胞黏附因子测定方法及生物学功能分析.pdfVIP

第十六章细胞因子与细胞黏附因子的测定

细胞因子是由活化的免疫细胞及某些基质细胞表达并分泌的活性物质，其主要生物学功能是介导和调

节免疫应答及炎症反应，其化学本质是蛋白质或多肽。

细胞黏附分子是介导细胞间及细胞与细胞外基质间黏附作用的分子，其化学本质为糖蛋白，可以细胞

膜表面表达和可溶性两种形式存在。

二者分别在机体的免疫调节、炎症应答、修复、转移等生理和病理过程中发挥重要作用。

第一节生物学测定方法

常见的生物学测定法包括：

基于检测的分子生物学测定法：细胞因子或细胞黏附分子扩增法、RNA印迹法、原位杂交法、

酶保护分析等，可定性或定量分析细胞因子和细胞黏附分子的或mRNA。

生物活性测定法：根据细胞因子特定的生物活性而设计的检测方法，主要用于细胞因子的测定。

一、促进细胞增殖和抑制细胞增殖测定法

（一）性核素掺入法：通过细胞合成的增加或减少来判断细胞增殖的方法。该法的优点是结

果客观，可常规用于大标本量的测定，但方法的特异性受依赖细胞株依赖程度的影响。此外，测定过程中

需要使用性核素，的处理较繁琐。

（二）MTT比色法：不使用性核素，以细胞代谢变化作为增殖指征来检测细胞因子生物活性的测

定方法。

二、细胞毒活性测定法

待测细胞因子做一系列稀释后加至指示细胞培养体系，以检测培养细胞的死细胞数作为判断指标，死

细胞数量与细胞因子的活性成正比。如TNF细胞的测定。

三、抗活性测定法

抗活性测定法主要用于IFN等细胞因子的检测。

四、趋化活性测定法

具有趋化活性的细胞因子，也称趋化因子，诸如IL-8、IL-16、PANTES、MCP及MIP等，能诱导中性粒

细胞、单核-巨噬细胞或淋巴细胞等定向迁移。其诱导细胞迁移的方式包括趋化性和化学增活性。趋化性是

诱导细胞由趋化因子低浓度处向趋化因子高浓度处做定向移动的特性，可采用琼脂糖和Boyden盲端微孔小

室趋化试验测定。化学增活性则指细胞因子增强细胞随机能力的特性，可采用琼脂糖小滴化学动力学

试验测定。

某些细胞因子的活性可通过刺激特定细胞分泌的代谢产物而间接反映，据此建立的测定方法，称为细

胞因子诱导产物测定法。

例如，IL-1可诱导胸腺细胞分泌IL-2，IL-2的水平可间接反映IL-1的活性；细胞因子诱导产物测定

法，是目前测定IL-1最常用的方法。

五、生物学活性测定方法学评价

用于细胞因子生物学活性测定，对细胞因子前体或其降解产物、与可溶性受体结合的细胞因子、细胞

因子聚合物等，均不能用此法检测。细胞因子受体拮抗物、细胞因子的天然抗体和类细胞因子等，也将干

扰细胞因子活性的测定。

细胞因子生物学活性测定法主要具有以下特点：

Chapter16DeterminationofCytokinesandCellAdhesionFactors

Cytokinesareactivesubstancesexpressedandsecretedbyactivatedimmunecellsandcertainstromalcells.Theirmainbiological

functionistomediateandregulateimmuneresponsesandinfltoryresponses.Theirchemicalnatureisproteinsorpolypeptides.

Celladhesionmolecuaremolecuthatmediateadhesionweencellsandweencellsandtheextrace