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演讲人：日期:检验科感染性疾病实验检测流程

CATALOGUE目录01标本前期处理02核酸检测技术03血清学检验流程04微生物培养鉴定05检验报告管理06生物安全保障

01标本前期处理

样本完整性核查采用双人同步核对患者信息、检测项目及样本类型，确保登记系统与物理样本一一对应，降低人为录入错误风险。双人核对机制异常样本处理对溶血、脂血或凝血异常的样本需单独记录并评估是否影响检测结果，必要时与临床沟通重新采集。接收样本时需严格检查容器密封性、标签信息完整性及样本量是否符合检测要求，避免漏液、破损或标识不清导致后续检测误差。样本接收与登记

自动化分类系统利用条码扫描技术将样本按检测项目（如生化、免疫、分子）自动分类，提高分拣效率并减少人工干预导致的交叉污染。唯一标识编码优先级标记样本分类与编号为每份样本生成包含患者ID、检测类型及批次号的复合条形码，确保全流程追溯性，避免混淆或数据丢失。根据临床紧急程度（如急诊、常规）对样本进行颜色标签分级，优化检测资源分配与报告出具时效。

根据不同样本类型（血清、血浆、全血）设定转速、时间及温度参数，确保分离效果一致且避免细胞成分破坏影响检测准确性。标准化离心参数在生物安全柜内进行分装，使用一次性无菌吸头及冻存管，防止微生物污染或样本间交叉污染，尤其适用于分子检测等高敏感项目。无菌分装操作精确计算分装体积以满足复检或附加检测需求，避免重复采样增加患者负担，同时预留备份样本用于质控验证。分装体积控制样本离心与分装

02核酸检测技术

核酸提取纯化样本前处理采用裂解液破坏细胞膜释放核酸，通过离心或磁珠吸附去除蛋白质、脂质等干扰物质，确保核酸纯度满足后续检测要求。自动化提取技术利用磁珠法或硅胶膜柱法实现高通量核酸提取，减少人为误差，提高提取效率，适用于大规模筛查场景。质量控制通过紫外分光光度计或荧光定量仪检测核酸浓度及完整性（A260/A280比值需在1.8-2.0之间），避免降解或污染影响检测结果。

PCR扩增操作精确配制包含引物、探针、dNTPs、Taq酶及缓冲液的混合液，确保扩增特异性与灵敏度，需在超净工作台内操作以防污染。反应体系配置循环参数优化内标与质控设置变性、退火、延伸三阶段温度及时间（如95℃变性30秒，55℃退火45秒，72℃延伸1分钟），循环次数通常为35-40次，避免非特异性扩增。加入内源性对照（如人类管家基因）监测提取效率，同时设置阴性、阳性对照以验证实验系统可靠性。

荧光信号采集对常规PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据条带大小与预期片段匹配度确认扩增特异性，需注意避免EB染料的潜在毒性风险。电泳验证数据复核与报告结合阴性/阳性对照结果复核原始数据，对临界值样本建议重复检测或采用其他方法学验证，最终出具规范化检测报告。实时荧光PCR通过阈值循环数（Ct值）定量目标核酸，Ct值≤38且扩增曲线呈典型S型判为阳性，需排除引物二聚体等假阳性干扰。产物分析判读

03血清学检验流程

通过检测血清中HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb五项指标，初步判断乙肝病毒感染状态、免疫应答及传染性，是筛查乙肝的常规手段。抗体筛查检测乙肝两对半检测采用ELISA或化学发光法检测HIV-1/2抗体，灵敏度高但需结合确证试验排除假阳性，适用于高危人群筛查和术前检查。HIV抗体初筛试验通过检测心磷脂抗体筛查梅毒感染，需结合TPPA等特异性试验进行确诊，用于早期梅毒筛查和疗效监测。梅毒非特异性抗体检测（RPR/TRUST）

确诊试验操作采用实时荧光定量PCR技术，直接检测病毒载量，用于确诊活动性感染、评估抗病毒疗效及耐药性监测，灵敏度可达20IU/mL。乙肝病毒DNA定量（HBVDNA）对初筛阳性样本进行HIV蛋白条带分析，确认抗体特异性，是HIV感染诊断的金标准之一，可区分HIV-1和HIV-2型。WesternBlot确证试验（HIV）通过检测梅毒螺旋体抗原的特异性抗体，与RPR联合使用可区分现症感染和既往感染，提高诊断准确性。梅毒螺旋体特异性抗体试验（TPPA/TPHA）

定量抗体测定03风疹病毒IgG抗体定量通过化学发光法测定抗体浓度，用于评估疫苗接种效果或自然感染后的免疫保护水平，临界值≥10IU/mL视为阳性。02丙肝病毒RNA（HCVRNA）定量采用RT-PCR技术检测病毒核酸载量，用于确诊活动性HCV感染、评估抗病毒治疗应答及复发风险，检测下限为15IU/mL。01血清转氨酶（ALT/AST）检测通过生化分析仪定量测定肝细胞损伤标志物，ALT40U/L提示肝损伤，辅助判断乙肝、丙肝等疾病的严重程度及预后。

04微生物培养鉴定

培养基接种规范无菌操作技术严格执行生物安全柜操作规范，使用灭菌接种环或棉签，避免交叉污染和环境微生物干扰。01分区划线法采用四区或三区划线