高效液相色谱技术 .pptVIP

第1页，共21页，星期日，2025年，2月5日7.1基本原理加样流动相流动相固定相流动相ACBBCA固定相——柱内填料，流动相——洗脱剂。HPLC是利用样品中的溶质在固定相和流动相之间分配系数的不同，进行连续的无数次的交换和分配而达到分离的过程。第2页，共21页，星期日，2025年，2月5日按溶质（样品）在两相分离过程的物理化学性质可以作如下的分类：分配色谱：——分配系数亲和色谱：——亲和力吸附色谱：——吸附力离子交换色谱：——离子交换能力凝胶色谱（体积排阻色谱）：——分子大小而引起的体积排阻第3页，共21页，星期日，2025年，2月5日分配色谱又可分为：正相色谱：固定相为极性，流动相为非极性。反相色谱：固定相为非极性，流动相为极性。用的最多，约占60～70％。固定相（柱填料）：固定相又分为两类：①一类是使用最多的微粒硅胶；②另一类是使用较少的高分子微球：优点是强度大、化学惰性、使用pH范围大(pH=1～14)；缺点是柱效较小，常用于离子交换色谱和凝胶色谱。第4页，共21页，星期日，2025年，2月5日最常使用的全孔微粒硅胶（3～10μm）是化学键合相硅胶，这种固定相要占所有柱填料的80％。它是通过化学反应把某种适当的化学官能团（例如各种有机硅烷），键合到硅胶表面上，取代了羟基（－OH）而成。它是近代高效液相色谱技术中最重要的柱填料类型。使用微粒硅胶要特别注意它的使用pH范围是2～7.5，若过碱（＞pH8），硅胶会粉碎或溶解；若过酸（＜pH1），键合相的化学键会断裂。有些特殊的健合相可以用于pH9～11。键合相使用硅胶作基质的优点是：①硅胶的强度大；②微粒硅胶的了孔结构和表面积易人为控制；③化学稳定性好。第5页，共21页，星期日，2025年，2月5日硅胶(SiO2?nH2O)：OHOH—Si—O—Si—?｜｜重要的键合相是：硅烷化键合相，它是硅胶与有机硅烷反应的产物。最常用的键合相键型是：｜｜