2025年实体肿瘤微卫星不稳定性实践指南PPT课件.pptxVIP

2025EMQN最佳实践指南：实体肿瘤微卫星不稳定性的分析与报道精准检测，规范诊疗新标准

目录第一章第二章第三章MSI基础概念概述分析与检测方法结果报道规范

目录第四章第五章第六章最佳实践应用临床意义与决策支持未来发展与展望

MSI基础概念概述1.

微卫星不稳定性定义与机制DNA重复序列变异的核心特征：微卫星不稳定性（MSI）指短串联重复序列（如单核苷酸或二核苷酸重复）因DNA错配修复（MMR）系统功能缺陷导致的插入或缺失突变累积，表现为基因组高频变异。MMR系统失活的关键作用：MMR基因（如MLH1、MSH2、MSH6、PMS2）突变或表观沉默（如MLH1启动子甲基化）会丧失纠正DNA复制错误的能力，直接引发MSI表型，是肿瘤发生的重要驱动因素。分子检测的黄金标准：MSI状态通过PCR扩增特定微卫星位点或二代测序（NGS）分析判定，其高灵敏度与特异性为肿瘤分型提供可靠依据。

免疫治疗响应预测MSI-H（高微卫星不稳定性）肿瘤因高突变负荷产生大量新抗原，显著增强PD-1/PD-L1抑制剂疗效，如结直肠癌中客观缓解率可达50%以上。Lynch综合征筛查意义约15%的MSI-H散发性肿瘤与遗传性MMR基因突变相关，需通过胚系检测区分，指导患者及其家族成员的癌症风险管理。化疗耐药性关联MSI-H肿瘤可能对5-氟尿嘧啶等传统化疗药物敏感性降低，需优先考虑免疫治疗或靶向方案。实体肿瘤MSI临床相关性

位点选择与验证：推荐使用包含≥5个单核苷酸位点（如BAT-25、BAT-26）的Panel，并通过正常-肿瘤配对样本验证，确保检测灵敏度≥95%。质控流程优化：实验室需建立内部质控标准，包括DNA提取质量评估（如片段化程度）、扩增效率监控及结果判读一致性验证。技术检测标准化建议结果分级与注释：明确区分MSI-H、MSI-L（低不稳定性）及MSS（稳定），并附加MMR蛋白免疫组化结果（如MLH1/PMS2缺失提示散发性甲基化）。治疗推荐整合：报告应包含基于MSI状态的FDA/NMPA批准疗法列表（如帕博利珠单抗适应症），并提示遗传咨询必要性。临床报告规范化要求EMQN指南框架简介

分析与检测方法2.

样本采集与前处理标准推荐使用福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）肿瘤组织作为标准样本，需确保肿瘤细胞含量≥20%，并明确标注坏死区域比例以避免假阴性结果。新鲜冷冻组织可作为替代方案，但需在-80℃条件下保存以保持DNA完整性。样本类型选择组织样本应在切除后30分钟内完成固定，采用10%中性缓冲福尔马林固定6-48小时，避免过度固定导致DNA片段化。显微切割前需进行HE染色评估肿瘤纯度。样本处理时效性采用经CE-IVD认证的DNA提取试剂盒，提取后DNA浓度应≥5ng/μL（Qubit定量），片段长度需200bp（电泳验证）。对于低质量样本，建议使用全基因组扩增技术进行补救。核酸提取规范

PCR-毛细管电泳金标准：推荐使用5个单核苷酸位点（BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、MONO-27）的NCIpanel，通过片段分析判定MSI状态（≥2个位点变异为MSI-H）。需配套使用荧光标记引物和内标基因（如PentaC/D）进行标准化。二代测序技术：针对50-500个微卫星位点的NGSpanel具有更高敏感性，可检测低频MSI事件（如MSI-L），但需设置≥5%的等位基因频率阈值。建议采用双端150bp测序模式，覆盖深度≥500×。多重荧光PCR系统：如PromegaMSIAnalysisSystemv1.2，包含7个位点（5个单核苷酸+2个五核苷酸），适用于自动化分析平台，需配套使用GeneMapper等专业分析软件进行峰型判读。免疫组化辅助验证：对MMR蛋白（MLH1、PMS2、MSH2、MSH6）进行IHC检测，与分子结果联合解读。需注意PMS2克隆号选择（EPR3947优于A16-4）及抗原修复条件优化。分子检测技术选择

质量控制与验证流程内部质控体系：每批次检测需包含已知MSI-H/MSS的对照样本（如NCI-HCT116/DLD-1细胞系），设置阴性对照（无模板对照）和阳性对照（人工合成MSI标准品），批次间CV值应15%。实验室间比对：建议每年参加EMQN或CAP组织的室间质评，采用≥20个盲样进行验证，要求MSI-H检出符合率≥95%，MSS特异性≥98%。对于NGS方法还需评估测序均一性（≥80%位点覆盖度100×）。生信分析验证：NGS数据需通过双算法验证（如MSIsensor2≥10%且MANTIS≥0.4判为MSI-H），原始数据保留FASTQ格式备查。毛细管电泳结果需经两名独立技术员判读，不一致时启动第三方复核机制。

结果报道规范3.

0102阈值设定明确MSI-H（高微卫星不稳定性）与MSS（微卫