结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药突变检测试剂盒（荧光PCR熔解曲线法）（CSZ2400102） (1).docxVIP

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受理号：CSZ2400102

体外诊断试剂产品注册技术审评报告

产品中文名称：结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药突变检测试剂盒

（荧光PCR熔解曲线法）

产品管理类别：第三类

申请人名称：厦门致善生物科技股份有限公司

国家药品监督管理局医疗器械技术审评中心

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目录

基本信息 3

一、申请人名称 3

二、申请人住所 3

三、生产地址 3

技术审评概述 4

一、产品概述 4

二、临床前研究概述 5

三、临床评价概述 9

四、产品受益风险判定 11

综合评价意见 13

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基本信息

一、申请人名称

厦门致善生物科技股份有限公司

二、申请人住所

厦门火炬高新区(翔安)产业区莲亭路884-2号

三、生产地址

厦门火炬高新区(翔安)产业区莲亭路884-1号及884-2号

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技术审评概述

一、产品概述

（一）产品主要组成成分

由扩增试剂和对照试剂组成。（具体详见说明书）

（二）产品预期用途

本产品用于体外定性检测来自结核病患者的结核分枝杆菌复合群阳性的痰液样本和培养物样本中结核分枝杆菌的吡嗪酰胺耐药基因突变。本产品通过对结核分枝杆菌复合群pncA基因全基因共187个氨基酸密码子区域内（561bp，吡嗪酰胺耐药决定区）和启动子区域-1～-16（16bp）的突变进行吡嗪酰胺耐药基因突变检测。本产品无法明确具体突变类型。

本产品可用于吡嗪酰胺耐药结核病的辅助诊断。

（三）产品包装规格

48测试/盒

（四）产品检验原理

采用荧光PCR熔解曲线法，其基本原理是：在PCR体系中加入两端分别标记有荧光基团与淬灭基团的探针，在PCR过程中扩增出与探针序列互补的单链寡核苷酸序列，在扩增完成后增加熔解曲线分析过程，同时实时监测荧光值的变化，通过计

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算荧光值与温度的负导数，可获得探针与该序列杂交产物的熔解曲线，并得出Tm值（熔点），从而推得该序列突变信息。如果靶序列与探针完全匹配，则探针与该序列杂交的Tm值最高；如果探针与序列不完全匹配，例如序列发生点突变、插入或者缺失，则探针与该序列杂交的Tm值低于探针与完全匹配序列杂交的Tm值。Tm值的降低程度与点突变类型、插入或缺失碱基数量以及突变位点的位置有关。同时在体系中D管对结核分枝杆菌gyrB基因进行检测，以辅助进行耐药判读。此外加入外源内标（拟南芥管家基因SUC2作为内标基因），对扩增体系进行质量控制。

二、临床前研究概述

（一）主要原材料

1.主要原材料的选择

主要原材料包括引物、探针、聚合酶、UNG酶、dNTPs、质粒等。主要原材料聚合酶和质粒为自产，其他原材料均为外购。引物、探针为申请人自行设计后由专业合成公司合成。申请人选择有资质的供应商提供原料，通过功能性试验筛选出最佳原材料和供应商，制定了各主要原材料的质量标准并经检验合格。

2.企业参考品和对照品的设置情况

企业参考品包括阳性参考品、阴性参考品、最低检出量参

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考品和重复性参考品。阳性参考品34支，由不同浓度和耐药突变类型的培养物和质粒DNA样本组成。阴性参考品10支，由不同类型的野生型培养物样本组成。最低检出量参考品1支。重复性参考品7支，由不同浓度和突变类型培养物样本组成。

还设置了阳性对照品和阴性对照品，用于检测过程中试剂和仪器的质量控制。其中阳性对照品为野生型靶基因质粒DNA构成，阴性对照品为不含任何靶基因的溶液。

（二）生产工艺及反应体系研究

申请人通过对试剂主要生产工艺的研究，确定了最佳生产工艺。

申请人对反应体系中引物、探针、聚合酶、UNG酶和dNTPs等的浓度和/或用量进行了优化，并对反应体系的扩增程序、变性时间、退火温度和时间、延伸温度和时间、扩增循环数、样本用量等进行了优化和验证。此外，对样本核酸的提取方法和取样量进行了验证，最终确定了最佳反应体系。

（三）分析性能评估

分析性能评估内容主要包括：准确度、精密度、最低检测限、分析特异性、核酸提取试剂性能等研究。

准确度研究中，申请人使用三批成品试剂盒，检测阴性（野生型）样本和阳性（突变型）样本。结果表明阳性符合率和阴

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性符合率均为100%，试剂盒的准确性符合设计要求。

精密度研究中，申请人使用三批成品试剂盒，对不同浓度（弱阳性样本、中等阳性样本）的不同型别的阳性样本和阴性样本，进行了重复性核酸提取和检测等在内的精密度研究，评估了试剂盒批内、批间及检测日内、日间、操作者间精密度。结果显示试剂盒批内/批间、日内/日间、不同操作者之间均有着很好的检测重复性，变异系数CV均不大于5%，精密度良好，符合设计要求。

最低检测限研究中，