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岩藻多糖通过调节肠道菌群增强抗PD-1免疫疗法对乳腺癌小鼠的抗肿瘤

作用

摘要

目的：

4T1BALB/c

通过给予皮下注射小鼠乳腺癌细胞（）的方式建立小鼠乳腺癌模型，

观察岩藻多糖是否具有增强抗PD-1单克隆抗体抑制乳腺癌的作用，利用16SrRNA测

序和非靶向代谢组学观察岩藻多糖与抗PD-1单克隆抗体联合治疗对乳腺癌小鼠肠道

菌群及其代谢物的影响，探究岩藻多糖能否通过调节肠道菌群及其代谢物增强抗PD-

1单克隆抗体免疫治疗的效果。

方法：

第一部分岩藻多糖协同抗PD-1单克隆抗体对乳腺癌小鼠的抗肿瘤效应

（1）40只6~8周龄的雌性BALB/c小鼠适应性喂养1周后，随机选取8只作为

Control324T1

组，喂食正常饮食和水，其余只小鼠用于建立小鼠乳腺癌皮下肿瘤模

4FucoidanPD-1Fucoidan+PD-1

型。模型建立成功后随机分为组，分别为组、组、组

和Model组。Fucoidan组：200mg/kg岩藻多糖每天灌胃，从肿瘤接种日持续到实验

结束；PD-1组：自肿瘤接种后第7天开始腹腔注射200µg抗PD-1单克隆抗体，每隔

3天注射1次，共注射4次；Fucoidan+PD-1组：200mg/kg岩藻多糖每天灌胃，从肿

瘤接种日持续到实验结束，接种后第7天腹腔注射200µg抗PD-1单克隆抗体，每隔

314ModelPBS

天注射次，共注射次；组：给予岩藻多糖等体积灌胃，从肿瘤接种

日持续到实验结束。

（2）流式细胞术检测小鼠脾脏中CD4+T、CD8+T细胞以及Treg的比例；免疫

组化法（IHC）检测小鼠肿瘤组织中CD4+T和CD8+T的表达；酶联免疫吸附法

ELISAIFN-γTNF-αGZMB-HE

（）检测小鼠血清中、和的含量；苏木精伊红（）染色

-GC-MS

法对小鼠结肠组织进行组织形态学和炎症评分；气相色谱质谱法（）检测小

鼠盲肠内容物中短链脂肪酸（SCFAs）的含量；16SrRNA测序检测小鼠的肠道菌群；

液相色谱-质谱法（LC-MS）对小鼠粪便进行非靶向代谢组学的检测。

第二部分验证肠道菌群在岩藻多糖增强抗PD-1抗体抗肿瘤中的作用

（1）40只6~8周龄的雌性BALB/c小鼠适应性喂养1周后，随机选取8只小鼠

Control32ABX

作为组，喂食正常饮食和水，其余只建立抗生素（）诱导的细菌耗竭

I

小鼠模型，给予抗生素混合物喂养14天。采用粪便细菌涂片革兰氏染色法确定小鼠

4T14

肠道菌群耗尽后建立小鼠乳腺癌皮下肿瘤模型，模型建立成功后随机分为组，

分别为Fucoidan组、PD-1组