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岩藻寡糖对D-半乳糖导致大鼠肾脏损伤的保护作用及机制研究

摘要

目的

通过颈背部皮下注射D-半乳糖导致大鼠肾脏损伤，探讨岩藻寡糖对肾脏损伤的

保护作用，并初步探索其可能的作用机制。

方法

1.实验分组及设计：对Sprague-Dawley（SD）大鼠适应性喂养1周后，随机分

为4组（10只/组）：分别为对照组（CON组）、模型组（MOD组）、低剂量岩藻寡

糖组（LF组）、高剂量岩藻寡糖组（HF组）。MOD、LF、HF组给予颈背部皮下注

射D-半乳糖（150mg/kg）；同时MOD组给予生理盐水灌胃、LF组给予岩藻寡糖灌

胃（100mg/kg）、HF组给予岩藻寡糖灌胃（200mg/kg）；CON组给予等量生理盐水

灌胃和颈背部皮下注射。实验共干预8周，干预结束后留取血液并离心，保存血清

备用。剥离大鼠肾脏用于后续指标的测定。

2.苏木精-伊红染色（Hematoxylin-eosinstaining，HE）和透射电镜观察大鼠肾

脏组织病理学和超微结构，同时进行β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色。

3.全自动生化分析仪测定大鼠肾功能：血清肌酐（creatinine，CR）、尿酸（uric

acid，UA）、尿素氮（bloodureanitrogen，BUN）水平。使用酶联免疫吸附法（Enzyme-

linkedimmunosorbentassay，ELISA）检测肾组织腺嘌呤核糖核苷酸（adenosine

monophosphate，AMP）、三磷酸腺苷（adenosine-triphosphate，ATP）以及血清和肾

组织中丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，

SOD）、过氧化氢酶（catalase，CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathioneperoxidase，

GSH-Px）的水平。

4.流式细胞术（FlowCytometer）检测大鼠肾脏组织中活性氧（reactiveosygen

species，ROS）水平。

5.蛋白质印迹法（Westernblot，WB）检测大鼠肾脏组织中腺苷酸活化蛋白激

酶（AMP-activatedproteinkinase，AMPK）、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶

(Phosphorylationalpha-AMP-activatedproteinkinase，p-AMPK)、UNC-51样激酶1（Unc-

51likeautophagyactivatingkinase1，ULK1）、磷酸化UNC-51样激酶1（Phosphorylated-

ULK1，p-ULK1）、酵母ATG6的哺乳动物同源物（themammalianorthologofyeast

ATG6，Beclin-1）、微管相关蛋白1A/1B-轻链3（microtubuleassociatedprotein1A/1B-

lightchain3，LC3Ⅱ/Ⅰ）和泛素结合蛋白62（protein62，p62）蛋白的表达水平。

结果

1.MOD组和LF组大鼠体重变化水平显著低于CON组（P＜0.05），HF组大鼠

体重变化水平显著高于MOD组（P＜0.05）。MOD组肾脏指数显著低于CON组（P

＜0.05），LF组和HF组肾脏指数显著高于MOD组（P＜0.05）。

2.与CON组相比，MOD组大鼠血清CR、UA和BUN水平显著增加88.6%、

184.5%和19.4%（P＜0.05），岩藻寡糖干预后明显降低CR、UA和BUN水平（P＜

0.05），HF组相较于LF组，血清UA和BUN水平分别降低31.1%和5.5%（P＜0.05）。

3.肾脏组织病理学观察结果显示，CON组大鼠肾小球结构完整。MOD组肾小

球出现一定程度萎缩，肾小球囊腔明显增大。岩藻寡糖干预后上述病理变化有所改

善。与CON组相比，MOD、LF和HF组大鼠肾细胞β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数

显著增加768.2%、339.7%和134.2%（P＜0.05），岩藻寡糖干预后阳性细胞数量明显

减少（P＜0