色谱柱使用及维护.pptVIP

拖尾峰第30页，共49页，星期日，2025年，2月5日可能原因：样品过载次保留效应，尤其是碱性物质填料中残留的痕量金属离子流动相试剂中的金属离子不合适的缓冲盐溶液第31页，共49页，星期日，2025年，2月5日解决方案：降低进样量加入扫尾剂（酸---1%乙酸；碱----10mmol/ml三乙胺，三乙胺无效，可改为EDTA）尽量采用色谱级试剂增加缓冲盐的浓度第32页，共49页，星期日，2025年，2月5日产生次保留效应的因素--离子交换效应离子交换效应：质子化的碱性分子与离子化的硅羟基发生离子交换产生次级保留效应第33页，共49页，星期日，2025年，2月5日产生次保留效应的因素—痕量金属离子金属离子所产生的强吸附位比硅羟基强50倍！！更易引起碱性物质的拖尾第34页，共49页，星期日，2025年，2月5日严重拖尾-----强保留组分第35页，共49页，星期日，2025年，2月5日色谱柱使用及维护第1页，共49页，星期日，2025年，2月5日实验室常用色谱柱：C8柱、C18柱、氰基柱、苯基柱、氨基柱、手性柱、离子交换柱不同色谱柱的选择依据色谱柱的结构良好的色谱柱使用习惯及维护建立方法时应注意的事项色谱柱失效的特征指示第2页，共49页，星期日，2025年，2月5日色谱柱类型分离原理备注常规RP柱相似相容常规NP柱相似相容离子交换色谱柱溶质离子与树脂交换中心离子相互作用强度的差异流动相的pH、离子强度手性色谱柱引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异一般以疏水作用和空间作用为主第3页，共49页，星期日，2025年，2月5日一般色谱柱选择的依据：以反相色谱为例：当被两种以上的分析物的疏水性存在较大差异时，选择一般的C8/C18即可；当被分析物疏水性相差无几，但氢键作用相差较大时，可选用氰基柱、氨基柱；苯基柱对含有不同芳环的芳香化合物具有较好的分离能力；对离子性化合物，可采用离子交换柱或者离子对反相色谱柱第4页，共49页，星期日，2025年，2月5日不锈钢柱管：可用于所有的有机溶剂与大多数水性缓冲液，然而含氯的流动相会缓慢地“卤素腐蚀”不锈钢柱管，尤其是低pH条件下柱管不锈钢成分（铁、镍、铬）牢固络合的样品可能发生这类问题，但因为色谱柱内壁的表面积很小，发生不良反应的机会不大色谱柱的结构第5页，共49页，星期日，2025年，2月5日多孔烧结物（滤片）：封闭色谱柱的两端，固体色谱柱的填料一般来说，5um与3um的微粒分别用2um与0.5um孔径的不锈钢滤片发生不良反应的可能比色谱柱内壁大得多峰型不好与样品回收率低可能预示滤片出现问题第6页，共49页，星期日，2025年，2月5日压帽：即色谱柱两端套合于柱管端外壁的塑性圆柱帽，中部有小孔，多为聚四氟乙烯制成，用于固定筛板密封环：位于接头螺旋环内壁的弹性环，多为聚四氟乙烯制成，用于色谱柱两端压帽与柱外壁的密封柱填料：色谱柱担体，常用的填料为硅胶、多孔聚合物、氧化铝等第7页，共49页，星期日，2025年，2月5日优点优良的物理特性可控的成熟工艺理想的表面活性优良的溶剂兼容性（不存在不溶胀）硅胶填料的特性第8页，共49页，星期日，2025年，2月5日缺点在高pH条件下，硅胶溶解第9页，共49页，星期日，2025年，2月5日第10页，共49页，星期日，2025年，2月5日良好的色谱柱使用习惯第11页，共49页，星期日，2025年，2月5日使用前的准备工作阅读使用说明书（特别注意使用事项、pH范围、保存条件）→按要求活化色谱柱→测定柱效，记录色谱柱参数信息→流动相平衡色谱柱进样建议：建立色谱柱信息台账（项目所属的色谱柱的柱压、拖尾因子、分离度、进样时间），定期对色谱柱进行柱效的测定建议：色谱柱项目专用----频换的更换流动相很容易降低色谱柱的寿命，并容易造成试验保留值的漂移第12页，共49页，星期日，2025年，2月5日第13页，共49页，星期日，2025年，2月5日

第14页，共49页，星期日，2025年，2月5日实例第15页，共49页，星期日，2025年，2月5日第16页，共49页，星期日，2025年，2月5日第17页，共49页，星期日，2025年，2月5日第18页，共49页，星期日，2025年，2月5日第19页，共49页，星期日，2025年，2月5日日常维护：每次分析结束后色谱柱的清洗反冲不同厂家不一致：月旭----正向使用，反向冲洗