器官培养-器官培养.ppt

*1、无菌培养体系的建立初代培养建立的无性繁殖系包括：茎梢、芽丛、胚状体和原球茎等。外植体的制备培养基培养条件第二节茎尖的培养2021/3/20*2、芽的增殖

（1）顶芽和腋芽的发育顶芽、侧芽生长，形成一个微型的小灌木丛状的丛生苗结构。丛生苗的每个枝条转接继代，可迅速获得多数的嫩茎。这种繁殖方式称作微型扦插或无菌短枝扦插优点：不经愈伤组织，所以最能使无性系后代保持原品种的特性。第二节茎尖的培养2021/3/20*（2）不定芽的发育不定芽产生的途径：外植体上直接产生由外植体诱导的愈伤组织上产生。第二节茎尖的培养外植体脱分化愈伤组织再分化器官原基2021/3/20*第二节茎尖的培养由第二阶段芽的增殖产生的数量有限的芽、苗、原球茎称为中间繁殖体。将之转接到新鲜的相同培养基上进行继代培养，3-4周转接一次，扩大培养。3、中间繁殖体的增殖2021/3/20*茎的培养发育方向腋芽萌发脱分化后产生胚状体（原球茎）脱分化后直接产生不定器官脱分化后形成愈伤组织第二节茎尖的培养2021/3/20*4、壮苗和生根壮苗目的：使增殖的嫩枝生根产生小植株，以便移栽。第二节茎尖的培养2021/3/20*用White、1/2或1/3MS、B5等生根培养基。降低N，P，K盐的量。适当加大生长素（如NAA），不用或少用细胞分裂素，或在无激素的培养基上生根。蔗糖降低到1.0-1.5%，以增强植株自养能力；加入1%左右的活性炭；增加光强度，以提高小植株的光合能力。第二节茎尖的培养试管苗生根的措施2021/3/20*5、移栽生根培养1个月左右。移植时可根据生根情况来进行。若发现新梢基部生有较浓密的不定根，长度在lcm以内，就可移栽人土。移栽时通过几天的炼苗过程，栽入塑料营养钵或育苗盘中，营养钵盛经烧烤或常压灭菌的培养土(1分腐殖土：1分沙)。2021/3/20*栽后给予较高的空气湿度条件。培养土要浇透水，所放置的床面也要浇湿，然后搭小拱棚，以减少水分的蒸腾，并且初期要常喷雾处理，保持拱棚薄膜上有水珠出现。当发现小苗有生长趋势，可逐渐减少湿度，将拱棚两端打开通风，并且减少喷水次数。使小苗适应湿度较小的条件。以后揭去拱棚的薄膜，并给予水分控制，少浇水或不浇水，促进小苗长得粗壮。温度管理上要掌握适宜的生根温度，最适宜的温度是16-20℃。光照管理上初期可用较弱的光照，在小拱棚上加盖遮阳网或报纸等，以防阳光灼伤小苗和增加蒸腾作用，后期可直接利用自然光照。5、移栽2021/3/20*5、移栽可用育苗盘进行驯化生根、孔径选择2cm左右即可。孔穴装入蛭石：珍珠岩：草炭土为1：1：0．5的基质。当小苗长至5cm高左右再移人塑料营养钵中。2021/3/20*(二)影响茎尖培养微繁殖的因素基因型外植体的大小供试植株的生理状态芽在植株上的部位供试植株的年龄培养基褐变玻璃化2021/3/20*（三）茎段的培养茎段培养指不带芽和带1个以上定芽或不定芽的，包括块茎、球茎在内的幼茎切段的无菌培养。培养茎段的主要目的是快繁。优点培养技术简单易行，繁殖速度较快；芽生芽方式增殖的苗木质量好，且无病，性状均一；解决不能用种子繁殖的无性繁殖植物的快速繁殖问题等。2021/3/20*图示茎段培养过程健康植株上选健壮的枝梢植株再生培养75%酒精1分钟1%次氯酸钠0.1%升汞去叶片用水冲洗茎段2021/3/20*(1)材料的选择和处理取生长健壮无病虫的幼嫩枝条或鳞茎盘，若是木本，取当年生嫩枝或一年生枝条，剪去叶片，剪成3-4cm的小段。取材时注意茎的基部比顶部切段，侧芽比顶芽的成活率低，所以应优先利用顶部的外植体，但由于每个新梢仅一个顶芽，也可利用腋芽，茎上部的腋芽培养效果较好。还应注意尽量在生长期取芽，在休眠期取外植体，成活率降低。如苹果在3-6月取材的成活率为60％，7-11月下降到10％，12-2月都下降10％以下。2021/3/20*(2)培养最常用的基本培养基为MS培养基，加入3％蔗糖，用0．7％的琼脂固化。培养条件保持25℃左右。经培养后茎段的切口特别是基部切口上会长出愈伤组织，呈现稍许增大，而芽开始生长，有时会出现丛生芽，从而得到无菌苗。在茎段培养中，促进腋芽增殖用6-BA是最为有效的，依次为Kt和Zt等。生长素虽不能促进腋芽增殖，但可改善苗的生长。GA对芽伸长有促进作用。2021/3/20*（3）继代两种途径：一是促进腋芽的快速生长，二是诱导形成大量不定芽。第一种途径的好处是不会产生变异