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控制菌检查法的验证目的：增加试验方法的完整性保证检验结果的可靠性。何时验证：建立供试品的微生物限度检查法时；供试品组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时。试验菌株：按规定检查的控制菌选择相应验证的菌株。阴性菌对照菌株第29页，共72页，星期日，2025年，2月5日控制菌检查法的验证菌液制备:50～100cfu/ml。验证方法：试验组、阴性菌对照组。结果判断：试验组应检出、阴性菌对照组不得检出。第30页，共72页，星期日，2025年，2月5日微生物限度检查法第31页，共72页，星期日，2025年，2月5日检验量检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml或cm2）。一般应随机抽取不少于检验用量（两个以上最小包装单位）的3倍量供试品。

第32页，共72页，星期日，2025年，2月5日除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml；中药膜剂为50cm2；化学膜剂为50cm2贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。要求检查沙门菌的供试品其检验量应增加10g或10ml。

第33页，共72页，星期日，2025年，2月5日供试液的制备根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。第34页，共72页，星期日，2025年，2月5日除另有规定外，常用的供试品制备方法1.液体供试品2.固体供试品3.特殊供试液制备方法（1）非水溶性供试品①司盘80②十四烷酸异丙酯第35页，共72页，星期日，2025年，2月5日（2）非水溶性膜剂供试品①肠溶及结肠溶供试品②气雾剂、喷雾剂供试品第36页，共72页，星期日，2025年，2月5日（3）具抑菌活性的供试品当供试品有抑菌活性时，应消除其抑菌活性后，再依法检查。常用的方法有：

①加大培养基量稀释法②离心沉淀集菌法③薄膜过滤法④中和法第37页，共72页，星期日，2025年，2月5日细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证1、计数方法的验证当建立药品的微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认该计数方法的可靠性。若供试品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，应进行计数方法可靠性的再验证。验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及下列要求进行。对各试验菌的回收率应逐一进行验证。

第38页，共72页，星期日，2025年，2月5日菌种验证试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），以保证试验菌株的生物学特性。应采用适宜的保存技术，防止试验菌株发生变异。第39页，共72页，星期日，2025年，2月5日方法验证CPBPUSPJP菌株大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠球菌黑曲霉大肠埃希菌金黄色葡萄球菌白色念珠球菌枯草芽孢杆菌大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠球菌黑曲霉大肠埃希菌金黄色葡萄球菌沙门菌加入菌量（cfu)50~100100105-106103检验方法中和法平皿法稀释法离心沉淀法薄膜过滤法中和法平皿法稀释法薄膜过滤法中和法平皿法稀释法薄膜过滤法平皿法稀释法平板表面涂抹法薄膜过滤法第40页，共72页，星期日，2025年，2月5日菌液制备用无菌0.9%氯化钠溶液制成每1ml含50~100cfu的菌悬液和50~100cfu的孢子悬液。菌种培养基培养温度（℃）培养时间（h）大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠球菌黑曲霉营养肉汤培养基改良马丁培养基35~3723~2818~2424~485~7（天）第41页，共72页，星期日，2025年，2月5日黑曲霉菌液的制备新鲜培养的黑曲霉斜面中加入3～5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，吸出孢子悬液（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～00cfu的孢子悬液。第42页，共72页，星期日，2025年，2月5日验证方法验证试验至少应进行3次独立的平行试验，并