靶向叶酸受体α(FRα)的程序性细胞死亡受体1敲低型嵌合抗原受体T细胞杀伤肝癌细胞的效果分析.pdfVIP

1128临床肝胆病杂志第41卷第6期2025年6月JClinHepatol，Vol.41No.6，Jun.2025

·肝脏肿瘤·DOI：10.12449/JCH250619

靶向叶酸受体α（FRα）的程序性细胞死亡受体1敲低型嵌合抗原

受体T细胞杀伤肝癌细胞的效果分析

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温军业，张浚琪，任行，张海强，叶学帅

1河北省人民医院肝胆外科，石家庄050000

2河北工程大学附属医院/临床医学院学科建设与研究生办，河北邯郸056002

3河北医科大学第二医院胃肠外科，石家庄050000

通信作者：叶学帅，yexueshuai@hebeu.edu.cn（ORCID：0009-0000-3665-3394）

摘要：目的探究靶向叶酸受体α（FRα）嵌合抗原受体（CAR）的程序性细胞死亡受体1（PD-1）敲低型T细胞（si-PD-1-CAR-T）

对肝癌细胞的清除能力。方法应用生物信息学数据库TCGA分析FRα抗原在肝癌及正常肝组织中的表达情况，以及FRα

表达与肝癌患者生存期的关系。分别将编码靶向FRα抗原的CAR结构的mRNA及mRNA联合靶向PD-1基因的小干扰RNA

（siRNA）使用电穿孔仪转导入T细胞，制备FRα-CAR-T和si-PD-1-CAR-T。流式细胞术分析FRα-CAR的表达效率和PD-1的

敲低效率。体外培养肝癌细胞系JHH-1和HepG2，采用流式细胞术分析FRα在肿瘤细胞表面的表达情况，将FRα-CAR-T、

si-PD-1-CAR-T及空载体转导的T细胞（MockT）作为效应细胞，JHH-1和HepG2作为靶细胞，CCK-8法检测在不同效靶比

（1∶1、2.5∶1、5∶1、10∶1、20∶1）时对靶细胞的杀伤效率；采用ELISA法分别检测效应细胞与靶细胞（10∶1）共培养上清中IFN-γ和

IL-2的分泌情况。计量资料符合正态分布时，两组间比较采用成组t检验，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较

采用SNK检验。采用Kaplan-Meier法分析比较患者生存差异。结果TCGA数据库分析显示，FOLR1在肝癌组织中表达水平

明显升高，FOLR1高表达肝癌患者的总生存期显著低于FOLR1低表达者（P=0.013）。将mRNA转导入T细胞后，FRα-CAR在

CAR-T和si-PD-1-CAR-T中的表达率可达89.8%和84.7%，使用mRNA和siRNA共转染可将T细胞的PD-1下调并维持至少7天

的PD-1低表达状态。FRα抗原在JHH-1细胞中表达率为100%，而在HepG2细胞中呈阴性表达。CCK-8结果显示，si-PD-1-

CAR-T对JHH-1细胞杀伤效率显著高于FRα-CAR-T细胞（P0.05）；ELISA结果显示，FRα-CAR-T细胞与JHH-1细胞共培养时，IL-2

分泌量较MockT细胞显著增加［（1032.50±135.90）pg/mLvs（50.26±7.87）pg/mL，P0.001］，IFN-γ分泌量显著增加［（1430.56±

184.20）pg/mLvs（89.05±11.26）pg/mL，P0.001］；si-PD-1-CAR-T与JHH-1细胞共培养后，IFN-γ和IL-2的释放水平较FRα-CAR-T

均显著提高（P值均0.05）。结论FRα是肝癌治疗的潜在靶点，敲低T细胞PD-1可显著提高FRα-CAR-T在体外的杀伤活性。

关键词：癌，肝细胞；嵌合抗原受体；叶酸盐受体1；程序性细胞死亡受体1

基金项目：河北省自然科学基金（H2024402005）

EfficacyofchimericantigenreceptorT-cellwithprogrammedcelldeath-1knockdowntargetingfolatereceptor

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