第22章免疫学检测技术.pptVIP

(2)迟发型超敏反应检测第62页，共90页，星期日，2025年，2月5日2.B细胞功能测定单扩ELISA速率比浊法测定各类免疫球蛋白含量抗体形成细胞测定第63页，共90页，星期日，2025年，2月5日（2）溶血空斑试验原理：第64页，共90页，星期日，2025年，2月5日临床应用与评价溶血空斑试验主要用于测定药物和手术等因素对体液免疫功能的影响评价免疫治疗或免疫重建后机体产生抗体的能力。第65页，共90页，星期日，2025年，2月5日B细胞抗体形成功能的检测

——酶联免疫斑点法原理：第66页，共90页，星期日，2025年，2月5日应用与方法学评价：该方法既可检测抗体分泌细胞，又可检测抗体分泌量。优点：稳定、特异、抗原用量少；可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌，并可定量；可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞。第67页，共90页，星期日，2025年，2月5日ELISPOT技术简介酶联免疫斑点试验(Enzymelinkedimmunospotassay)80年代，国外的科研工作者根据ELISA技术的基本原理，建立了体外检测特异性抗体分泌细胞和CK分泌细胞的固相酶联免疫斑点技术（ELISPOT）。因其具有较高的特异性和敏感性，目前正被国内外广泛应用，对探索自身免疫系统疾病发病机制具有重要意义。第68页，共90页，星期日，2025年，2月5日ELISPOT的基本原理细胞受到刺激后局部产生细胞因子，此细胞因子被特异单克隆抗体捕获。细胞分解后，被捕获的细胞因子与生物素标记的二抗结合，其后再与酶标记（例如碱性磷酸酶）的亲和素结合。底物（BCIP/NBT，产物为蓝紫色）孵育后，PVDF孔板出现“紫色”的斑点表明细胞产生了细胞因子，通过酶联斑点分析系统对斑点分析后得出结果。第69页，共90页，星期日，2025年，2月5日4)发光免疫分析(luminescenceimmunoassayLIA)将发光分析系统和免疫测定相结合而建立的一种新的超微量免疫分析技术。优点：该方法既具有免疫反应的高度特异性又有发光分析的高灵敏度。第30页，共90页，星期日，2025年，2月5日化学发光免疫测定吖啶酯、鲁米诺生物发光免疫测定萤火虫、发光水母化学发光酶免疫测定辣根过氧化物酶（HRP）碱性磷酸酶（AP）电化学发光免疫测定第31页，共90页，星期日，2025年，2月5日5)免疫胶体金技术用胶体金标记一抗或二抗，检测特异性抗原或抗体的方法第32页，共90页，星期日，2025年，2月5日6)免疫印迹法（Westernblotting）该法是将凝胶电泳与固相免疫相接合的检测技术，即将电泳分区的蛋白质转移到固相载体，再用酶免疫、放射免疫技术测定。常用于检测多种蛋白质第33页，共90页，星期日，2025年，2月5日免疫印迹法示意图第34页，共90页，星期日，2025年，2月5日第35页，共90页，星期日，2025年，2月5日4.蛋白质芯片技术：又称蛋白质微阵列是一种高通量的蛋白功能分析技术，可用于蛋白质表达谱分析，研究蛋白质与蛋白质的相互作用，甚至DNA－蛋白质、RNA－蛋白质的相互作用，筛选药物作用的蛋白靶点等。第36页，共90页，星期日，2025年，2月5日原理：是将各种蛋白质有序地固定于载玻片等各种介质载体上成为检测的芯片，然后，用标记了有特定荧光物质的抗体与芯片作用，与芯片上的蛋白质相匹配的抗体将与其对应的蛋白质结合，抗体上的荧光将指示对应的蛋白质及其表达数量。第37页，共90页，星期日，2025年，2月5日第三节免疫细胞功能的检测第38页，共90页，星期日，2025年，2月5日第39页，共90页，星期日，2025年，2月5日免疫细胞的分离外周血单个核细胞分离淋巴细胞的分离T细胞和B细胞的分离T细胞亚群的分离第40页，共90页，星期日，2025年，2月5日(一)外周血单个核细胞分离外周血单个核细胞（peripheralbloodmononuclearcells,PBMCs）包括淋巴细胞和单核细胞（monocyte）。Ficoll分离液法主要用于分离外周血中的单个核细胞，是一种单次差速密度梯度离心的分离法。第41页，共90页，星期日，2025年，2月5日细胞分离基本原理不同细胞密度不同不同细胞表面生物学特性不同不同细胞表面分化抗原不同第42页，共90页，星期日，2025年，2月5日不同细胞密度不同人的红细胞密度为1.09