模块五　第十单元　第55课时　基因工程的基本工具和基本操作程序.pptxVIP

;;;;;2．基因工程的基本工具

(1)限制性内切核酸酶（限制酶）;①限制酶的识别序列一般由6个核苷酸组成，少数由4个、8个或其他数量的核苷酸组成。

②限制酶作用的化学键只能是磷酸二酯键。

③在切割含目的基因的DNA分子时，需用限制酶切割两次此DNA分子，产生4个末端。只有这样才能使目的基因的两端都有可连接的黏性末端或平末端。;(2)DNA连接酶;①DNA连接酶连接的是两个DNA片段，而DNA聚合酶是把单个的脱氧核苷酸连接到已有的DNA片段上。

②DNA聚合酶起作用时需要以一条DNA链为模板，而DNA连接酶不需要模板。;(3)载体;(1)通过基因工程技术能够定向改造生物的遗传性状。()

(2)E.coliDNA连接酶只能连接黏性末端。()

(3)DNA连接酶具有特异性，只能连接同一种限制性内切核酸酶切割形成的黏性末端。()

(4)若两种限制酶的识别序列相同，则形成的末端一定能通过DNA连接酶相互连接。()

(5)限制性内切核酸酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的概率就越大。();(6)载体质粒上常有特殊的标记基因，以便于重组DNA分子的筛选。()

(7)载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选的标记基因。()

(8)（选择性必修3P72正文）天然的DNA分子不能直接用作基因工程载体的原因有哪些？

提示：天然的DNA分子一般不完全具备作为载体的全部条件，需要进行人工改造后才能用于基因工程操作。;;A．若用SmaⅠ完全切割该DNA，则其产物的长度为634bp、896bp、758bp

B．若虚线方框内的碱基对被T—A替换，则用SmaⅠ完全切割该DNA可产生3种片段

C．若用MboⅠ和BamHⅠ切割该DNA，可形成相同的黏性末端

D．用SmaⅠ切割该DNA产生的片段，用E.coliDNA连接酶重新将其连接效率较高;解析：SmaⅠ的识别序列为5′--CCC↓GGG--3′，则用SmaⅠ完全切割该DNA会产生三个片段，即637bp、890bp、761bp，A错误；若虚线方框内的碱基对被T—A替换，则用SmaⅠ完全切割该DNA可产生2种片段，B错误；BamHⅠ、MboⅠ识别的序列分别为5′--G↓GATCC--3′、5′--↓GATC-3′，则二者切割该DNA，可形成相同的黏性末端，C正确；用SmaⅠ切割该DNA产生的片段为平末端，用E.coliDNA连接酶连接效率低，D错误。;2．（2024·江西??）γ-氨基丁酸在医药等领域有重要的应用价值。利用L-谷氨酸脱羧酶(GadB)催化L--谷氨酸脱羧是高效生产γ--氨基丁酸的重要途径之一。研究人员采用如图方法将酿酒酵母S的L--谷氨酸脱羧酶基因(gadB)导入生产菌株E.coliA构建了以L--谷氨酸钠为底物高效生产γ--氨基丁酸的菌株E.coliB。下列叙述正确的是();A．上图表明，可以从酿酒酵母S中分离得到大量目的基因gadB

B．E.coliB发酵生产γ--氨基丁酸时，L--谷氨酸钠的作用是供能

C．E.coliA和E.coliB都能高效降解γ--氨基丁酸

D．可以用其他酶替代NcoⅠ和KpnⅠ构建重组质粒;解析：从酿酒酵母S中分离得到含有目的基因gadB序列的染色体DNA，如题图所示，若要获取大量目的基因，需要进行PCR和酶切，A错误；题意显示，用L--谷氨酸脱羧酶(GadB)催化L--谷氨酸脱羧是高效生产γ--氨基丁酸的重要途径之一，E.coliB中能表达L--谷氨酸脱羧酶(GadB)，因此可用E.coliB发酵生产γ--氨基丁酸，该过程中L--谷氨酸钠的作用不是供能，B错误；E.coliA中没有L--谷氨酸脱羧酶(GadB)，因而不能使L--谷氨酸钠脱羧，而E.coliB中含有该酶的基因，因而能使L--谷氨酸钠脱羧，高效生产γ--氨基丁酸，C错误；除了NcoⅠ和KpnⅠ外，还有其他的限制酶可选，此外，构建重组质粒也未必非要用这两种酶，而是可以用同尾酶替代，D正确。;;名称;名称;;;(3)目的基因的获取

①人工合成目的基因。

②常用______特异性地快速扩增目的基因。;2．基因表达载体的构建——基因工程的核心

(1)目的：使目的基因在________中稳定存在，并且遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。

(2)基因表达载体的组成及作用;启动子、终止子、起始密码子、终止密码子对比;项目;(3)构建过程;3．将目的基因导入受体细胞;受体细胞;①农杆菌转化法中的两次拼接和两次导入：第一次拼接是将目的基因拼接到Ti质粒的T--DNA上，第二次拼接（非人工操作）是指插入目的基因的T-DNA拼接到受体细胞的染色体DNA上；第一次导入是导入农杆菌，第二次导入（非人工操作）是将含目的基因的T-