第三节免疫检测技术的基本原理.pptVIP

酶联免疫吸附试验(ELISA-间接法)第30页，共85页，星期日，2025年，2月5日包被固相载体:用已知抗原包被固相载体加待检标本:使相应抗体与固相抗原结合洗涤，除去无关的物质加酶标抗抗体:与固相载体上抗原抗体复合物结合；洗涤，除去未结合的酶标抗抗体加底物显色根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量测定第31页，共85页，星期日，2025年，2月5日（三）竞争法此法可用于抗原和半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。第32页，共85页，星期日，2025年，2月5日用已知特异性抗体包被固相载体测定管加待测抗原和一定量的酶标抗原使二者与固相抗体竞争结合对照管只加一定量酶标抗原与固相抗体直接结合分别洗涤除去未结合的成分加底物显色分别测定两管的吸光度值，根据对照管与测定管吸光度值之比，计算标本中待测抗原含量第33页，共85页，星期日，2025年，2月5日对照管由于只加酶标抗原，与固相抗体充分结合，故分解底物显色深；测定管的显色程度则随待测抗原和酶标抗原与固相抗体竞争结合的结果而异。如待测抗原量多，竞争性地抑制酶标抗原与固相抗体结合，使固相上结合的酶标抗原量减少。因此，加入底物后显色反应较弱。第34页，共85页，星期日，2025年，2月5日饲料中盐酸克伦特罗的测定饲料中毒素的测定（主要包括黄曲霉毒素，简曲霉毒素）饲料中有害微生物的快速筛检（如沙门氏菌）甲胺磷残留分析甲基对硫磷残留分析呋喃丹残留分析ELISA在饲料安全检测中的应用ELISA用于农药残留的检测第35页，共85页，星期日，2025年，2月5日河豚毒素植物毒素如罌粟硷、吗啡、藻类毒素苯并芘主要有除草剂与杀虫剂两大类例如杀暝松（FN）、甲氟磷酸异已酶（SOMAN）、草不绿（Alachor）、西维因（Carbaryl）、多菌灵及克菌丹（Captan）等。农药的检测：第36页，共85页，星期日，2025年，2月5日食源性病原菌检测试剂盒大肠杆菌检测沙门氏菌检测单增李斯特菌金黄色葡萄球菌第37页，共85页，星期日，2025年，2月5日转基因成份的检测：如转基因玉米中中的cry9e蛋白转基因大豆中的CP4EPSPS蛋白质．肉制品的掺假检测：以辣根过氧化物酶标记不同动物肌肉和血清球蛋A抗血清检查牛肉、马肉、猪肉、羊肉和驼肉检测14种畜禽熟肉制品，包括牛肉、羊肉、鹿肉和马肉等，在掺假率为1%时即可检出食品其他检测：第38页，共85页，星期日，2025年，2月5日荧光抗体技术的原理与方法

用荧光素标记抗原或抗体，再与标本中抗体或抗原反应，然后在荧光显微镜下观察，形成的IC可散发出荧光，对标本中的抗原或抗体进行测定和定位。常用的荧光素异硫氰酸荧光素(FITC)、藻红蛋白(PE)等。常用的方法直接荧光法间接荧光法第39页，共85页，星期日，2025年，2月5日免疫荧光技术第40页，共85页，星期日，2025年，2月5日免疫荧光技术——直接法AgY荧光素标记的特异性抗体组织切片第41页，共85页，星期日，2025年，2月5日免疫荧光技术——间接法AgYY荧光素标记的抗抗体组织切片待测抗体第42页，共85页，星期日，2025年，2月5日免疫荧光技术第43页，共85页，星期日，2025年，2月5日荧光显微镜第44页，共85页，星期日，2025年，2月5日荧光显微镜使用原理激发滤片（BG）吸收滤片（OG）标本FITC吸收光峰值：490-495nmFITC发射光峰值：520-530nmBG：325-500OG：410-650第45页，共85页，星期日，2025年，2月5日免疫金标记技术免疫金标记技术(Immunogoldlabellingtechique)主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测。这一反应也可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银染色（immunogol