第5章基因组序列诠释4丹尼斯.ppt

相似性高于一致性，可替代就是指同一性质的氨基酸取代。氨基酸的比较和基因比较，因为3个碱基的沉默突变。氨基酸决定了性质。高温下的防止二级结构构建cDNA文库，用目的基因DNA片段筛选文库。????

人类基因组中可知的序列功能10%，拟南芥中只有9%，约定的假定的蛋白质基因有20-40%。D大肠杆菌43%，酵母。30%。RNAi最根本的特点是特异性RNAi具有特殊的穿越能力，如将双链RNA注射在线虫性腺里，它也会干扰到体细胞里的基因表达，而且干扰作用会传给后代；RNAi对一些低水平表达的基因的RNAi现象并不明显，而且几个有相同或相似序列的基因，RNAi也会同时作用与它们。许多蛋白质必须与其他蛋白质互作，才能表现其功能，当鉴定了这类蛋白质的某些成员，则可采用某些方法分离与之互作的其他蛋白质玉米Ubiquitin启动子自于细菌的NPTII基因编码新霉素磷酸转移酶，能赋予细胞抗卡那霉素的能力，RNAi作用机理AdsRNA核酸内切酶Dicer被激活，它把dsRNA加工成21~25个核苷酸长的RNA链；B这些小片段RNA(siRNA)作为另一个核糖核酸复合体RISC(RNA-inducesilencingcomplex,RNA诱导沉默复合体)的指引物，结合到RISC上，使之识别并降解mRNA，从而导致与双链RNA同源的基因沉默；第62页，共83页，星期日，2025年，2月5日第63页，共83页，星期日，2025年，2月5日RNAi设计方法及应用AFraser合成与开放读码框相对应的双链RNA或利用细菌克隆表达这些双链RNA→微量注射和喂食→干扰同源基因的表达BChuang等设计出嵌合体结构→连接强启动子大量表达双链mRNA→干扰同源基因的表达第64页，共83页，星期日，2025年，2月5日HbF基因的RNAi载体构建第65页，共83页，星期日，2025年，2月5日RNAi技术的优缺点RNAi最根本的特点是特异性RNAi具有特殊的穿越能力，而且干扰作用会传给后代；RNAi对一些低水平表达的基因的RNAi现象并不明显，而且几个有相同或相似序列的基因，RNAi也会同时作用与它们。第66页，共83页，星期日，2025年，2月5日3.2基因超表达增加基因的拷贝数采用强启动子促使基因超表达第67页，共83页，星期日，2025年，2月5日构建转座子突变库酵母双杂交（yeasttwo-hybridization）3.3 其他方法第68页，共83页，星期日，2025年，2月5日3.3.1转座子插入突变第69页，共83页，星期日，2025年，2月5日上世纪三十年代，玉米遗传学家BarbaraMcClintock在研究中发现了玉米籽粒色斑不稳定遗传的现象，可能是一种可转移的遗传因子。第70页，共83页，星期日，2025年，2月5日1948年McClintock首先确认和提出了转座子的概念，这一重大发现并未引起人们的重视，70年代后在原核和真核生物中不断发现有转位因子.◆转座遗传因子又叫可移动因子，是指一段特定的DNA序列。它可以在染色体组内移动，从一个位点切除，插入到一个新的位点。这种切除和移动，能够引起基因的突变或染色体重组。◆它是McClintock(1956)在玉米上首先发现的。这是遗传学发展史上重要的里程碑之一。基因能够在染色体上移动位置，也就是说能“转座”或“跳动”，这在当时对许多遗传学家来说简直是件前所未闻的事情。因为按照传统的观念，基因在染色体上是固定不变的，它们有一定的位置、距离和顺序，它们只可以通过交换或重组改变自己的相对位置，通过突变改变自己的相对性质；但是，要从染色体的一个位置“跳”到另一个位置，甚至“跳”到别的染色体上，科学家们从来连想都没有想过。因此，他们在读了麦克林托克1950年发表的《玉米易突变位点的由来与行为》，和1951年发表的《染色体结构和基因表达》两篇论文后，许多人都认为她可能是“发疯”了，“稳定”的基因居然能随意移动!这就连当时一流的遗传学家也无法理解麦克林托克的语言，她受到了前所未有的冷遇。“转座因子”的概念麦克林托克早在1938年就已提出了，但直到1976年，在美国冷泉港召开的“DNA插入因子、质粒和游离基因”专题讨论会上，与会科学家明确地承认可以用麦克林托克的术语“转座因子”，来说明所有能够插入基因组的DNA片段。麦克林托克在这时才真正成为基因调控的“调节—操纵子理论”的先驱。早在20世纪40年代初期，麦克林托克完全是通过个人的努力、用传统的遗传学和细胞学研究的手段，得出了“转座因子”的概念，解决了用分子生物学和分子遗传学的方法才能解