1.2 微生物的培养技术及应用（第二课时）（课件）高二生物（人教版2019选择性必修3）.pptxVIP

选择性必修三《生物技术与工程》第1章发酵工程第2节微生物的培养技术及应用微生物的选择培养和计数（第二课时）微量移液器

目录课堂小结探究新知04情境导入030201课堂练习四.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一.选择培养基二.微生物的选择培养三.微生物的数量测定

情境导入在美国黄石国家公园的一个热泉中发现了耐热的水生栖热菌，并分离到耐高温的DNA聚合酶。寻找耐高温的DNA聚合酶美国黄石公园PCR是一种在体外DNA复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。耐高温的酶耐高温生物体寻找高温环境寻找人为提供有利于目的菌生长的条件（包括营养、温度和pH）等，同时抑制或阻止其他微生物生长。实验室筛选原理:启示选择培养基

401在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。类型条件分离得到的菌种水生栖热菌酵母菌、霉菌等真菌金黄色葡萄球菌能消除石油污染的微生物自养型微生物固氮菌选择培养基1.概念:2.方法:一.选择培养基改变培养条件70～80℃的高温添加某种化学物质加入青霉素高浓度食盐特殊碳、氮源石油是唯一碳源营养缺陷不加碳源不加氮源

思考：1.如让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基配方该如何设计？2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？以尿素为唯一氮源，只有能合成脲酶细菌才能生长。除以尿素为唯一氮源外，该培养基其他营养成分与普通培养基基本相同。选择培养基配方的设计一.选择培养基尿素施入土壤后，会被某些细菌分解成NH3，再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。这些细菌能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。尿素[CO(NH2)2]

3.怎么证明一个选择培养基具有选择性呢？应设置基础培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基）或完全培养基作为对照，若基础培养基或完全培养基中生长的菌落数菌多于该选择培养基，则该选择培养基具有选择性。基础培养基选择培养基那么1g土壤中有多少能分解尿素的细菌？一.选择培养基选择培养基配方的设计

02分离：获得分解尿素的细菌的纯培养物计数：测定分解尿素的细菌的数量概念：将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基的表面，进行培养。主要过程:①梯度稀释菌液②涂布平板稀释度足够高时，能在培养基表面形成单个菌落。二.微生物的选择培养稀释涂布平板法1g土壤中有多少能分解尿素的细菌？稀释涂布平板法的具体操作步骤?

021×101mL1mL1mL1mL1mL1mL1×1021×1031×1041×1051×1061×1079mL无菌水90mL无菌水10g①铲取土样，将样品装入纸袋中注意：取土样用的小铁铲和盛土样的的纸袋在使用前都要灭菌。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。②将10g土样加入盛有90mL无菌水锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。（1）梯度稀释：二.微生物的选择培养稀释涂布平板法操作微量移液器

902③取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。⑤将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。注意：多余的酒精在烧杯中滴尽，然后再放在火焰上灼烧。④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。浸涂灼滴注：各梯度分别涂布3个平板,1个不涂布作空白对照。（2）涂布平板：二.微生物的选择培养稀释涂布平板法操作

待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30-37℃的恒温培养箱中，培养1-2d。稀释103倍稀释104倍稀释105倍空白对照恒温培养箱思考：设置空白对照组的目的是什么？检测培养基灭菌是否彻底，保证实验结果的准确性。根据实验结果，能否计算出细菌数目的是多少？原理是什么？可以。培养与观察：二.微生物的选择培养

②计数原则：①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个______。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少______。活菌活菌选择30-300个菌落的平板进行计数；每个稀释度至少取3个平板取其平均值；统计的结果一般用菌落数而不是活菌数；统计的菌落往往比活菌的实际数目低；恰当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。三.微生物的数量测定——间接计数法——直接计数法1.稀释涂布平板法2.显微镜直接计数法1.间接计数法——稀释涂布平板法

M：代表稀释倍数；C：代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；V：代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)4号试管的结果表明每克土壤中的活菌数约为________个③