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miR-200a靶向调控β-catenin对肾小管上皮细胞转分化的影响及机制探究

一、引言

1.1研究背景

肾间质纤维化（Renalinterstitialfibrosis，RIF）是各类慢性肾脏疾病进展至终末期的共同病理结局，严重威胁着人类的健康。其主要病理特征为细胞外基质（Extracellularmatrix，ECM）在肾间质过度沉积以及间质成纤维细胞异常增生，导致肾脏正常结构被破坏，功能逐渐丧失。据统计，全球慢性肾脏病（Chronickidneydisease，CKD）的发病率呈上升趋势，而RIF作为CKD进展的关键环节，给社会和家庭带来了沉重的负担。

肾小管上皮细胞转分化（Epithelial-mesenchymaltransition，EMT）被认为是RIF发生发展的重要发病机制之一。在正常生理状态下，肾小管上皮细胞具有明确的极性和紧密的细胞间连接，能够维持肾脏的正常功能。然而，在多种致病因素，如炎症、氧化应激、高血糖等刺激下，肾小管上皮细胞会发生一系列生物学行为的改变，逐渐失去上皮细胞的特性，如E-cadherin表达减少，同时获得间质细胞的特征，如α-平滑肌肌动蛋白（α-smoothmuscleactin，α-SMA）和纤连蛋白（Fibronectin，FN）表达增加，最终转化为成纤维细胞或肌成纤维细胞。这些转化后的细胞能够大量分泌ECM，促进肾间质纤维化的形成。研究表明，在RIF过程中，约36%的肌成纤维细胞是由小管上皮细胞转化而来，充分说明了EMT在RIF中的关键作用。

Wnt/β-catenin信号通路是一条在生物进化过程中高度保守的细胞间信号传导通路，在胚胎发育、细胞增殖、分化、迁移以及组织稳态维持等生理过程中发挥着至关重要的作用。在正常肾脏中，该信号通路处于相对静止状态。但当肾脏受到损伤时，Wnt/β-catenin信号通路会被异常激活。具体过程为：Wnt蛋白与细胞膜上的Frizzled受体和低密度脂蛋白受体相关蛋白（Low-densitylipoproteinreceptor-relatedprotein，LRP）5/6组成的复合物结合，激活下游的Dishevelled蛋白，进而抑制糖原合成酶激酶-3β（Glycogensynthasekinase-3β，GSK-3β）的活性。GSK-3β活性受到抑制后，无法磷酸化β-catenin，使得β-catenin在细胞质中积累并进入细胞核。在细胞核内，β-catenin与T细胞因子（Tcellfactor，TCF）/淋巴增强因子（Lymphoidenhancerfactor，LEF）家族转录因子结合，启动一系列靶基因的转录，如c-myc、cyclinD1、matrixmetalloproteinase-7（MMP-7）等，这些靶基因的表达产物参与调节细胞的增殖、分化和ECM的合成与降解，从而促进肾间质纤维化的发展。众多研究已证实，Wnt/β-catenin信号通路的激活与RIF的发生发展密切相关，通过特异性调控下游靶基因的表达，如成纤维细胞、锌指转录因子1（Snail1）、M2巨噬细胞、MMP-7、纤溶酶原激活物抑制剂-1（Plasminogenactivatorinhibitor-1，PAI-1）、肾素-血管紧张素系统（Renin-angiotensinsystem，RAS）等，可促进肾纤维化。例如，在单侧输尿管梗阻（Unilateralureteralobstruction，UUO）小鼠模型中，Wnt4、β-catenin的表达明显上调，同时伴随着肾间质纤维化程度的加重；在高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞中，Wnt4/β-catenin信号通路被激活，导致上皮细胞发生EMT，表现为E-cadherin表达减少，α-SMA表达增加。

微小核糖核酸（MicroRNA，miRNA）是一类内源性非编码小分子RNA，长度约为22个核苷酸。它们通过与靶基因mRNA的3非翻译区（3-untranslatedregion，3-UTR）互补配对，在转录后水平调控基因的表达，从而参与细胞增殖、分化、凋亡、代谢等多种生物学过程。近年来，越来越多的研究表明miRNA在肾间质纤维化的发生发展中发挥着重要的调控作用，成为了肾脏病领域的研究热点之一。miR-200家族作为miRNA中的重要成员，在多种生理和病理过程中扮演着关键角色。已有研究报道，miR-200a在肝脏纤