第三节动物细胞工程.pptVIP

第1页，共40页，星期日，2025年，2月5日动物细胞间的连接方式紧密连接间隙连接隔壁连接中间连接桥粒连接第2页，共40页，星期日，2025年，2月5日2动物细胞培养定义动物细胞与组织培养是从动物体内取出细胞或者组织，模拟体内的生理环境，在无菌、适温和丰富的营养条件下，使离体细胞或者组织生存、生长并维持结构和功能的一门技术。是动物细胞工程的基础。第3页，共40页，星期日，2025年，2月5日3发展历史1907，美国的哈里森使用盖玻片悬滴培养蛙胚神经组织细胞第4页，共40页，星期日，2025年，2月5日4生长特性贴附生长型如人胚肺细胞，Hela细胞，巨噬细胞，神经细胞悬浮生长型细胞如血液白细胞，淋巴组织细胞等第5页，共40页，星期日，2025年，2月5日5体外培养细胞基本技术体外培养特点体外培养工具体外培养条件体外细胞生长增殖过程培养方法大规模培养技术第6页，共40页，星期日，2025年，2月5日5.1体外培养特点营养条件苛刻适应性差,敏感培养时间长，易污染第7页，共40页，星期日，2025年，2月5日培养工具器皿为各种类型的培养瓶、培养皿、培养室、小室等载体：空心纤维和微珠第8页，共40页，星期日，2025年，2月5日5.2体外培养工具空心纤维微球第9页，共40页，星期日，2025年，2月5日5.3体外培养条件温度，37度pH：7.2-7.4气体，氧，二氧化碳，氮气营养条件需要多种氨基酸，维生素，辅酶，核酸，嘌呤，嘧啶，激素和生长因子，其中多种成分可以由血清提供第10页，共40页，星期日，2025年，2月5日动物细胞培养基天然培养基：主要有血清，组织提取液、鸡胚汁合成培养基无血清培养基第11页，共40页，星期日，2025年，2月5日动物细胞培养必需的溶液平衡盐水培养基pH细胞消化液：把组织解离成分散细胞胰蛋白酶消化液和EDTA溶液抗生素溶液第12页，共40页，星期日，2025年，2月5日

5.4体外细胞生长增殖过程原代培养期传代培养期衰退期第13页，共40页，星期日，2025年，2月5日5.5培养方法悬滴：最早由Harrison1907年创立旋转管：灌注小室培养瓶培养板第14页，共40页，星期日，2025年，2月5日原代培养与传代培养技术1）组织快培养首先从机体获得组织快，然后放入一个培养皿中用Hanks液洗，用小剪刀剪成1mm3的组织快，加入少许培养液，塞上瓶塞置于37度培养箱培养，成单层后做传代培养。为促进细胞帖壁，也可以瓶内壁涂一层血清。第15页，共40页，星期日，2025年，2月5日组织消化培养过程取材分离和组织消化培养过程接种、培养-常规检查第16页，共40页，星期日，2025年，2月5日传代培养技术当原代培养成功后，细胞分裂增殖扩展成片，占满器皿表面。这时需要对其分离培养，这一操作过程称为传代。（1）吸取培养瓶内旧培养液。（2）加入胰蛋白酶和EDTA混合液盖满瓶底。（3）2-5min后检查，如有细胞间隙变大或细胞质回缩现象，终止消化。（4）吸出消化液，加入Hanks液。（5）用吸管轻打瓶壁，使细胞脱落成悬浮液（6）重新接种第17页，共40页，星期日，2025年，2月5日贴壁培养技术贴壁培养的材料：1）玻璃2）塑料3）金属4）微载体第18页，共40页，星期日，2025年，2月5日基本操作1）将培养材料用物理或生物化学法分散成细胞悬浮液。2）过滤、离心、纯化、漂洗后接种到有适宜培养液的培养系统中。3）放入CO2培养箱培养。第19页，共40页，星期日，2025年，2月5日生长过程及优点游离期吸附期繁殖期退化期优点：1）贴壁培养比较容易更换培养基2）容易采用灌注培养，提高细胞密度。3）更有效表达同一产品。4）方便地调节培养液和细胞比例。5）易于观察细胞生长状况。第20页，共40页，星期日，2025年，2月5日5.6大规模培养技术悬液培养，使用微球载体微载体培养多孔载体培养微囊化培养中空纤维法第21页，共40页，星期日，2025年，2月5日动物细胞生物反应器培养动物细胞培养用生物反应器种类：微载体式中空纤维式：最经典，最常用灌注培养式旋转壁式第22页，共40页，星期日，2025年，2月5日6动物细胞培养的应用1962年开始，用于生物医学研究，生产酶制剂，生长因子，疫苗，单抗等，酶类，激素，病毒杀虫剂（1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单