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ICS65.120

B40

团体标准

T/HXCY129-2025

杂交苜蓿种子真实性鉴定SSR分子标记法

AuthenticityidentificationofalfalfahybridseedsbySSRmarkers

2025-7-23发布2025-7-24实施

北京华夏草业产业技术创新战略联盟发布

T/HXCY129—2025

杂交苜蓿种子真实性鉴定SSR分子标记法

1范围

本文件规定了SSR分子标记法鉴定杂交苜蓿种子真实性的术语和定义、缩略词、原

理、仪器设备、所需试剂、引物、实验步骤、数据统计分析及结果分析等内容。

本文件适用于杂交苜蓿种子真实性鉴定、品种的审定、新品种知识产权保护及种子市

场监管。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日

期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本

（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T2930.4草种子检验规程发芽试验

GB/T39917主要农作物品种真实性和纯度SSR分子标记检测稻

DB62/T4094草品种真实性检验规程SSR标记法

DB6521/T074SSR分子标记鉴定甜瓜杂交种纯度技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1简单重复序列simplesequencerepeat(SSR)

是由1个～6个核苷酸为基本单位，通过连续串联重复形成的DNA片段，通常在几十

个至几百个bp之间，又称微卫星序列或短串联重复序列，重复单元的数量在不同个体或物

种中高度可变，形成多态性标记，是遗传分析的重要工具。

3.2琼脂糖凝胶电泳agarosegelelectrophoresis

是一种基于分子大小分离DNA片段的常用分子生物学技术。琼脂糖凝胶电泳利用琼

脂糖凝胶作为介质，在电场作用下，使带负电的核酸分子（DNA）从负极向正极迁移，通

过凝胶孔径的分子筛效应，实现不同大小核酸片段的分离。分离后的核酸可通过染色进行

可视化分析。

3.3聚合酶链式反应polymerasechainreaction(PCR)

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是一种在体外快速扩增特定DNA片段的分子生物学技术，通过模拟DNA天然复制过

程，实现目标序列的指数级扩增。DNA双链变性：高温（约95℃）使双链DNA解链为

单链模板；引物退火：降温（通常是55℃～65℃）使特异性引物与单链DNA的互补区域

结合；链延伸：在72℃左右下，DNA聚合酶以单链为模板，按照碱基互补配对原则，以

5→3方向合成新链；重复循环上述步骤，实现DNA指数增长。

3.4引物primer

是人工合成的短核苷酸序列（通常在18bp～30bp之间），能够通过碱基互补配对与模

板DNA特异性结合，引导DNA聚合酶从3端开始合成新链。

3.5聚丙烯酰胺凝胶电泳polyacrylamidegelelectrophoresis(PAGE)

是一种基于分子大小、电荷或构象分离DNA的高分辨率电泳技术。以聚丙烯酰胺凝

胶为介质，通过交联聚合反应，利用电场驱动带电分子迁移。

4缩略词

下列缩略语适用于本文件。

bp：basepair，碱基对

DNA：deoxyribonucleicacid，脱氧核糖核苷酸

DNAmarker：用于比较DNA