基于转录组学分析自然感染绵羊肺腺瘤病毒患羊肺肿瘤组织中转录差异基因及病毒致瘤机制的研究.pdfVIP

第46卷第2期中国预防兽医学报Vol.46,No.2

2024年2月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineFeb.2024

doi:10.3969/j.issn.1008-0589.202307006

基于转录组学分析自然感染绵羊肺腺瘤病毒患羊肺肿瘤组

织中转录差异基因及病毒致瘤机制的研究

（1.内蒙古农业大学兽医学院，内蒙古呼和浩特010018；2.农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室，

内蒙古呼和浩特010018；3.内蒙古自治区基础兽医学重点实验室，内蒙古呼和浩特010018)

摘要：绵羊肺腺瘤病(OPA)是由绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)引起的绵羊传染性肺肿瘤疾病。为探究JSRV对绵羊

肺脏的致瘤机制，本研究从自然感染JSRV的羊(OPA患羊)肺肿瘤组织和健康羊肺组织中提取总RNA，构建二者的

cDNA文库后采用IluminaHiSeq4000高通量测序平台进行转录组学测序(RNA-Seq)，采用DESeqR筛选健康绵羊与

患病绵羊肺组织中的转录差异基因，并以P0.05和log2(Foldchange)≥1筛选转录显著差异基因。通过GO和KEGG

数据库对转录显著差异基因进行GO功能和KEGG信号通路的富集分析，并采用RT-qPCR对随机选择的10个转录显

著差异基因进行验证。结果显示，与对照组相比，OPA羊肺肿瘤组织中共筛选到1360个转录上调基因和783个转

录下调基因，其中154个转录显著上调基因，212个转录显著下调基因。GO功能分析显示，转录显著差异基因显

著富集在178个GO条目中，包括114个生物过程(BP)、19个细胞成分(CC)和45个分子功能(MF)，主要涉及生长因

子活性、复制后修复、NAD+二磷酸酶活性、核苷代谢过程和鸟苷核苷酸交换因子活性等生物学功能。KEGG分析

显示转录显著差异基因主要富集在细胞增殖、分化和肿瘤生成，如PI3K/Akt、MAPK和Hippo等信号通路。

RT-qPCR结果显示，10个转录显著差异基因与RNA-Seq筛选结果均一致。本研究进一步通过RT-qPCR、Westerm

blot检测Hippo信号通路核心蛋白哺乳动物STE20样蛋白激酶1/2(MST1/2)、大肿瘤抑制因子1/2(LATS1/2)、YES相

关蛋白1/2(YAP1)在两组绵羊肺组织样品中的转录及表达水平和YAP1的磷酸化水平(p-YAP1)；采用免疫组化试验

(IHC)检测Hippo信号通路中上述核心蛋白在两组绵羊肺组织中的表达及定位。RT-qPCR结果显示，与对照组相

比，OPA羊肺组织中MST1和YAP1mRNA的转录水平均极显著上调(P0.01、P0.001)，LATS1mRNA的转录水平

显著上调(P0.05)。WesternblotMST1/2结果显示，蛋白在59ku、YAP1和p-YAP1蛋白在65ku、LATS1/2蛋白在140ku

处分别出现特异性条带；与对照组相比，OPA绵羊肺肿瘤组织中MST1/2和p-YAP1的表达水平显著上调(P0.05),

LATS1/2和YAP1的表达水平极显著上调(P0.01)。IHC结果显示，在OPA组和对照组羊肺组织中MST1/2、LATS1/2

及p-YAP1均定位于肺组织细胞质中，且与对照组相比，OPA组羊肺组织中上述分子均呈强阳性表达。YAP1主要

定位于对照组羊肺组织细胞的胞质中，而在OPA组中YAP1主要定位于细胞核中(少量定位于细胞质中)。上述结果

表明，OPA组绵羊肺组织中存在转录显著差异基因，主要参与细胞增殖、肿瘤发生和转移等过程，且主要富集在

PI3K/Akt、MAPK、Hippo等信号通路，尤其是Hippo信号通路中的YAP蛋白可能通过核异位促进肿瘤的发生与发

展。本研究为JSRV致瘤机制提供了新的研究基础与研究思路和方向。

关键词：绵羊肺腺瘤病；绵羊肺腺瘤病毒；转录组学分析；Hippo信号通路

中图分类号：S852.6文献标识码：A文章编号：1008-0589(2024)02-0185-10

*Correspondingauthor

收稿日期：2023-07-11

基金项目：国家自然科学基金项目32360863)；内蒙古科技重大专项计划资助项目(