蛋白质的共价结构.pptVIP

（一）、肽和肽键的结构第31页，共88页，星期日，2025年，2月5日①肽键中C-N键有部分双键性质——不能自由旋转②组成肽键原子处于同一平面（肽平面）③键长及键角一定④大多数情况以反式结构存在第32页，共88页，星期日，2025年，2月5日（一）肽单元参与肽键的6个原子C?1、C、O、N、H、C?2位于同一平面，C?1和C?2在平面上所处的位置为反式(trans)构型，此同一平面上的6个原子构成了所谓的肽单元(peptideunit)。第33页，共88页，星期日，2025年，2月5日共价主链第34页，共88页，星期日，2025年，2月5日（二）、肽的物理化学性质肽末端α-羧基pKa值比游离AA中的大。肽末端α-氨基pKa值比游离AA中的小。等电点（两性）。酸碱性质取决于：—α-羧基、α-氨基、侧链基团的解离具有双缩脲反应——Pr特有的反应。第35页，共88页，星期日，2025年，2月5日（三）、天然存在的重要多肽第36页，共88页，星期日，2025年，2月5日第37页，共88页，星期日，2025年，2月5日第38页，共88页，星期日，2025年，2月5日谷胱甘肽(glutathione,GSH)第39页，共88页，星期日，2025年，2月5日GSH过氧化物酶H2O22GSH2H2OGSSGGSH还原酶NADPH+H+NADP+第40页，共88页，星期日，2025年，2月5日三、蛋白质一级结构的测定什么是Pr的一级结构？蛋白质中氨基酸的排列顺序。第41页，共88页，星期日，2025年，2月5日第42页，共88页，星期日，2025年，2月5日1.样品必需纯（97%以上）2.知道蛋白质的分子量3.知道蛋白质由几个亚基组成4.测定蛋白质的AA组成并根据分子量计算每种AA的个数5.测定水解液中的氨量计算酰胺的含量前提第43页，共88页，星期日，2025年，2月5日（一）、蛋白质测序策略(1)测定蛋白质分子中多肽链的数目通过测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋白质分子量之间的关系，即可确定多肽链的数目。蛋白质一级结构的测定第44页，共88页，星期日，2025年，2月5日（一）、蛋白质测序策略(2)多肽链的拆分蛋白质一级结构的测定第45页，共88页，星期日，2025年，2月5日（一）、蛋白质测序策略几条多肽链借助非共价键连接在一起，称为寡聚蛋白质，血红蛋白为四聚体，烯醇化酶为二聚体。可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍处理，即可分开多肽链(亚基)。蛋白质一级结构的测定第46页，共88页，星期日，2025年，2月5日（一）、蛋白质测序策略(3)断开二硫键在8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下，用过量的?-巯基乙醇处理，使二硫键还原为巯基，然后用烷基化试剂保护生成的巯基，防止重新被氧化。蛋白质一级结构的测定第47页，共88页，星期日，2025年，2月5日第48页，共88页，星期日，2025年，2月5日（一）、蛋白质测序策略蛋白质一级结构的测定(4)测定每条多肽链的AA组成，并计算出AA成分的分子比第49页，共88页，星期日，2025年，2月5日第50页，共88页，星期日，2025年，2月5日（一）、蛋白质测序策略(5)分析多肽链的N-末端和C-末端(6)多肽链断裂成多个肽段采用两/多种不同的断裂方法将多肽断裂成两套或多套肽段，并将其分离。蛋白质一级结构的测定第51页，共88页，星期日，2025年，2月5日（一）、蛋白质测序策略(7)测定每个肽段的氨基酸顺序蛋白质一级结构的测定(8)确定肽段在多肽链中的次序利用两/多套肽段的AA顺序彼此间的交错重叠，拼凑出整条多肽链的AA顺序。第52页，共88页，星期日，2025年，2月5日（一）、蛋白质测序策略(9)确定原多肽链中二硫键的位置。蛋白质一级结构的测定第53页，共88页，星期日，2025年，2月5日两类多肽链末端氨基酸残基：N-端氨基酸C-端氨基酸在肽链氨基酸顺序分析中，最重要的是N-端氨基酸分析法。（二）、末端氨基酸残基测定第54页，共88页，星期日，2025年，2月5日Sanger法1、末端分析?二硝基氟苯（DNFB）法O2NFNO2+H2NCHCROHNCHCROO2NNO2H+H2OO2NNO2HNCHCROOH+氨基酸DNFBN