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抗CD163兔单克隆抗体的开发、鉴定及应用前景探究

一、引言

1.1研究背景

单克隆抗体技术自1975年由GeorgesK?hler和CesarMilstein创立以来，历经了鼠源性单克隆抗体、嵌合性单克隆抗体、人源化单克隆抗体和全人源单克隆抗体四个发展阶段，是现代生物技术领域的重大突破。杂交瘤技术作为单克隆抗体制备的经典方法，将免疫小鼠的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，生成的杂交瘤细胞既具备瘤细胞在体外快速增殖的能力，又拥有免疫脾细胞合成和分泌特异性抗体的特性，使得大规模生产高纯度、特异性强的单克隆抗体成为可能。随着分子生物学和生物技术的飞速发展，噬菌体展示技术、单B细胞技术等新兴技术不断涌现，极大地推动了单克隆抗体技术的发展与应用范围的拓展。

兔单克隆抗体作为单克隆抗体领域的重要成员，近年来受到了广泛关注。与传统的小鼠单克隆抗体相比，兔单克隆抗体具有诸多独特优势。在抗体谱方面，兔的免疫系统能够识别更多表位，产生更广泛的抗体谱。兔有着不同于人类和小鼠的免疫应答机制，当受到外界抗原刺激时，兔不仅通过与人和小鼠类似的组合连接基因片段产生主要抗体谱系，还在抗体谱系产生的第二阶段，通过体细胞超突变和独特的基因转换机制，进一步丰富抗体的多样性，使其能够识别部分鼠抗无法识别的抗原，尤其适用于针对弱免疫原性抗原的抗体开发。

在免疫球蛋白结构上，兔免疫球蛋白为四类（不含IgD），血清中丰富的IgG没有亚类，且在N末端和D-E环中氨基酸较少，重链可变区具有额外二硫键，使得兔IgG结构更简单、性质更稳定，这不仅有利于抗体药物开发中关键抗体的分子克隆，也能让实验室应用实验结果更加稳定。在亲和力与特异性上，兔单抗表现卓越，大多数单抗的解离常数（Kd）在纳摩尔或亚纳米级别，而兔单抗可达到皮摩尔级，高亲和力和高特异性使其在免疫组化（IHC）等实验应用中展现出更好的潜力，能够提供更清晰、准确的实验结果。在人源化方面，虽然传统的CDR移植方法在人源化过程中存在一些问题，但新开发的MutationalLineage-Guided（MLG）人源化技术，使得兔单抗的人源化更加容易，且由于兔脾淋巴细胞数量众多，通过该技术可以产生足够有生物活性的兔单抗，用于筛选性能良好的人源化抗体。从优质单抗药的筛选应用来看，兔子脾脏中淋巴细胞数量比小鼠多出50倍，可从每个免疫的脾产生数百个抗体库，为筛选优质单抗和药物靶点提供了更多可能，有助于寻找治疗肿瘤和癌症的潜在药物。

CD163作为一种I型跨膜糖蛋白，属于清道夫受体cysteine-rich（SRCR）超家族成员，是髓系细胞表面的特异性受体，在多种生理和病理过程中发挥着不可或缺的作用。在炎症反应中，CD163能够识别并结合炎症相关分子，如血红蛋白-结合珠蛋白复合物，通过内吞作用将其清除，从而调节炎症微环境。在免疫调节方面，CD163阳性的巨噬细胞，特别是M2型巨噬细胞，参与免疫应答的调控，影响机体的免疫平衡。在肿瘤研究领域，CD163作为肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）的重要标记物，其表达水平与肿瘤的发生、发展、转移以及预后密切相关。研究表明，肿瘤组织中CD163阳性TAMs的浸润程度越高，往往预示着肿瘤的恶性程度越高、预后越差。例如，在乳腺癌、肺癌、肝癌等多种恶性肿瘤中，CD163的表达均被发现与肿瘤的不良预后相关。此外，CD163还在心血管疾病、自身免疫性疾病等领域展现出重要的研究价值，在动脉粥样硬化斑块中，CD163阳性巨噬细胞的表型变化与疾病的进展密切相关；在类风湿性关节炎等自身免疫性疾病中，CD163的表达水平也发生改变，参与疾病的病理过程。

鉴于兔单克隆抗体的独特优势以及CD163在生理和病理研究中的重要地位，开发高特异性、高亲和力的抗CD163兔单克隆抗体具有重要的科学意义和潜在的应用价值。一方面，该抗体可以为深入研究CD163的生物学功能和作用机制提供有力的工具，有助于揭示相关生理和病理过程的分子机制；另一方面，在临床诊断和治疗领域，抗CD163兔单克隆抗体有望作为潜在的诊断标志物或治疗靶点，为疾病的早期诊断和精准治疗提供新的策略和方法。

1.2研究目的与意义

本研究旨在开发一种高特异性、高亲和力的抗CD163兔单克隆抗体，并对其进行全面的鉴定和表征，以满足生命科学研究和临床诊断治疗领域对该抗体的迫切需求。通过运用先进的单克隆抗体制备技术，如杂交瘤技术、噬菌体展示技术或单B细胞技术，从免疫后的兔子体内筛选出能够稳定分泌抗CD163抗体的细胞克隆，进而获得大量高质量的抗CD163兔单克隆抗体。

在生命科学研究领域，抗CD163兔单克隆抗体的开发具有重要意义。CD163在