第十二章机体免疫功能的检测技术.pptVIP

51Cr释放法杀伤率（%）=实验孔cpm-自发释放孔cpm最大释放孔cpm-自发释放孔cpm×100第62页，共90页，星期日，2025年，2月5日返回第63页，共90页，星期日，2025年，2月5日（二）NK细胞的分离单核细胞:粘附法B细胞:尼仑棉纤维T细胞:E-玫瑰花环沉降法返回PBMCNK第30页，共90页，星期日，2025年，2月5日第二节体液免疫功能的检测一、免疫球蛋白的定量检测二、B细胞数目及功能的检测返回第31页，共90页，星期日，2025年，2月5日一、免疫球蛋白的定量检测返回（1）单相免疫扩散试验（2）双相免疫扩散试验（3）火箭电泳（4）中和反应（5）ELISA第32页，共90页，星期日，2025年，2月5日单相免疫扩散试验返回FLASH第33页，共90页，星期日，2025年，2月5日双相免疫扩散试验第34页，共90页，星期日，2025年，2月5日双相免疫扩散试验返回FLASH第35页，共90页，星期日，2025年，2月5日（3）火箭电泳第36页，共90页，星期日，2025年，2月5日返回第37页，共90页，星期日，2025年，2月5日血清抗体病毒接种细胞或鸡胚计算半数保护率（PD50）（4）中和反应返回第38页，共90页，星期日，2025年，2月5日返回第39页，共90页，星期日，2025年，2月5日二、B细胞数目及功能的检测1.外周血B细胞数目的检测2.外周血B细胞功能的检测返回第40页，共90页，星期日，2025年，2月5日1.外周血B细胞数目的检测◆免疫荧光技术◆花环试验返回第41页，共90页，星期日，2025年，2月5日荧光显微镜第42页，共90页，星期日，2025年，2月5日返回CD19CD3流式细胞仪第43页，共90页，星期日，2025年，2月5日B细胞EA、EAC玫瑰花环形成示意图返回第44页，共90页，星期日，2025年，2月5日2.外周血B细胞功能的检测◆B细胞非特异性增殖◆抗体产生能力返回第45页，共90页，星期日，2025年，2月5日返回B细胞+刺激物（PWM，LPS）第46页，共90页，星期日，2025年，2月5日溶血空斑试验第47页，共90页，星期日，2025年，2月5日酶联免疫斑点试验返回第48页，共90页，星期日，2025年，2月5日第三节细胞免疫功能的检测一、T细胞亚群和数目的检测二、T细胞功能的检测三、其他免疫细胞功能的检测返回第49页，共90页，星期日，2025年，2月5日一、T细胞亚群和数目的检测2.免疫荧光技术1.花环试验3.免疫酶细胞技术返回第50页，共90页，星期日，2025年，2月5日返回玫瑰花环试验正常范围:60-80%E-花环形成率=形成花环的淋巴细胞数淋巴细胞总数(形成和未形成花环的细胞总数)第51页，共90页，星期日，2025年，2月5日荧光显微镜第52页，共90页，星期日，2025年，2月5日返回流式细胞仪第53页，共90页，星期日，2025年，2月5日二、T细胞功能的检测（一）体外功能实验（二）体内功能实验返回第54页，共90页，星期日，2025年，2月5日（一）体外功能实验1.淋巴细胞增殖试验2.细胞毒试验返回51Cr释放法乳酸脱氢酶释放法细胞凋亡检测法第55页，共90页，星期日，2025年，2月5日1.淋巴细胞增殖试验非特异性刺激物（PHA、ConA）特异性刺激物（抗原）3H-TdR掺入法MTT法形态学计数法第56页，共90页，星期日，2025年，2月5日形态学计数法转化细胞：体积大，染色质疏松呈细网状，核/细胞比例变小未转化细胞：体积小，核染色体致密，核/细胞比例大第57页，共90页，星期日，2025年，2月5日转化率=转化细胞数/淋巴细胞总数评价标准：60-80%为正常，50-59%为偏低，50%为降低第58页，共90页，星期日，2025年，2月5日淋巴细胞+刺激物培养56h加入3H-TdR24h后收集细胞于玻璃纤维滤膜液闪仪测定放射性(cpm)刺激指数(SI)=刺激孔cpm/对照孔cpm3H-TdR掺入法正常值SI2第59页，共90页，星期日，2025年，2月5日第60页，共90页，星期日，2025年，2月5日MTT法[3-4,4-二甲基噻唑－2]，5－二苯基四氮唑溴盐，简称MTT；线粒体的琥珀