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基于血清蛋白质组学解析连萸降压胶囊对自发性高血压大鼠的降压机制

一、引言

1.1研究背景与意义

高血压作为全球范围内的公共卫生挑战，严重威胁人类健康。据统计，全球约有10亿高血压患者，且患病率呈上升趋势。高血压是心脑血管疾病的重要危险因素，与脑卒中、心肌梗死、心力衰竭等疾病的发生密切相关，显著增加了患者的致残率和死亡率。在中国，高血压的患病率也不容乐观，2015年必威体育精装版调查数据显示，我国成年人（年龄＞18岁）人群的高血压患病率大约为27.9%，即每3-4个成年人中就有一个高血压患者。高血压不仅给患者带来身体上的痛苦，也给家庭和社会带来沉重的经济负担。

目前，临床上治疗高血压的药物种类繁多，包括利尿剂、β受体阻滞剂、钙通道阻滞剂、血管紧张素转换酶抑制剂和血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂等。这些药物在控制血压方面发挥了重要作用，但部分患者存在药物不良反应、依从性差等问题，且仍有部分患者血压难以得到有效控制。因此，寻找安全、有效、副作用小的降压药物具有重要的临床意义。

中医药在高血压的治疗中具有独特的优势，其多靶点、多途径的作用机制能够整体调节机体功能，改善症状，减少并发症的发生。连萸降压胶囊作为一种中药复方制剂，由黄连、吴茱萸等多味中药组成，具有清热燥湿、泻火解毒、疏肝下气等功效。前期研究表明，连萸降压胶囊对自发性高血压大鼠具有一定的降压作用，但其降压机制尚未完全明确。

蛋白质组学作为后基因组时代的重要研究领域，能够从整体水平上研究蛋白质的表达、修饰、相互作用及其功能，为揭示疾病的发病机制和药物的作用靶点提供了新的视角。血清作为一种易于获取的生物样本，包含了丰富的蛋白质信息，能够反映机体的生理和病理状态。通过血清蛋白质组学技术研究连萸降压胶囊对自发性高血压大鼠的降压机制，有助于深入了解其作用靶点和信号通路，为其临床应用提供科学依据，也为开发新型降压药物提供新思路。

1.2研究目的与内容

本研究旨在运用血清蛋白质组学技术，深入探究连萸降压胶囊对自发性高血压大鼠的降压机制，为其临床应用提供科学依据，并为新型降压药物的研发开拓思路。具体研究内容如下：

观察连萸降压胶囊对自发性高血压大鼠血压的影响：通过测量给药前后大鼠的收缩压、舒张压和平均动脉压，分析连萸降压胶囊的降压效果及作用时间，明确其对血压的调节作用。

分析连萸降压胶囊对自发性高血压大鼠血清蛋白质表达的影响：采用双向凝胶电泳技术，分离正常对照组、模型对照组和连萸降压胶囊给药组大鼠的血清蛋白质，获得蛋白质表达图谱。通过图像分析软件，比较各组图谱中蛋白质点的数量、位置和丰度，筛选出差异表达的蛋白质点，初步了解连萸降压胶囊对血清蛋白质表达的影响。

鉴定和分析连萸降压胶囊干预下自发性高血压大鼠血清中的差异蛋白点：运用质谱技术对筛选出的差异蛋白点进行鉴定，获取其氨基酸序列信息。通过生物信息学分析，如蛋白质数据库有哪些信誉好的足球投注网站、功能注释和信号通路分析等，明确差异表达蛋白质的功能和参与的生物学过程，探讨连萸降压胶囊的降压作用靶点和潜在的信号传导通路。

1.3研究方法与技术路线

1.3.1研究方法

动物实验：选取自发性高血压大鼠（SHR）作为研究对象，将其随机分为模型对照组和连萸降压胶囊给药组，另设正常对照组（Wistar-Kyoto大鼠，WKY）。连萸降压胶囊给药组给予不同剂量的连萸降压胶囊灌胃，模型对照组和正常对照组给予等量的生理盐水灌胃，连续给药一定时间。期间定期测量各组大鼠的血压，包括收缩压（SBP）、舒张压（DBP）和平均动脉压（MAP），采用无创血压测量仪进行测量，以观察连萸降压胶囊对血压的影响。

血清样本采集与处理：在给药结束后，对各组大鼠进行麻醉，腹主动脉取血，将血液收集于离心管中，3000r/min离心15min，分离血清，将血清样本分装后保存于-80℃冰箱备用。

双向凝胶电泳（2-DE）：对血清样本进行蛋白质定量，采用Bradford法或BCA法。取等量的蛋白质样品进行双向凝胶电泳分析。第一向进行等电聚焦（IEF），根据蛋白质的等电点不同在pH梯度胶条上进行分离；第二向进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS），依据蛋白质的分子量大小进一步分离。电泳结束后，对凝胶进行染色，常用的染色方法有考马斯亮蓝染色、银染等，以获得清晰的蛋白质表达图谱。

图像分析：利用凝胶成像系统对染色后的凝胶进行扫描，获取图像。采用专业的图像分析软件，如ImageMaster2DPlatinum等，对图像进行分析，包括蛋白质点的检测、匹配、定量等，筛选出在各组间表达差异显著的蛋白质点，差异倍数一般设定为≥1.5或≤0.67。

质谱分析（MS）：将筛选出的差异蛋白点从凝胶上切下，进行胶内酶解，常用的酶为胰蛋白酶。酶解后的肽段通过基质辅助激光解吸电离飞行