乳腺癌HER2_neu基因荧光原位杂交诊断体系：构建、验证与临床转化.docxVIP

乳腺癌HER2/neu基因荧光原位杂交诊断体系：构建、验证与临床转化

一、引言

1.1研究背景与意义

乳腺癌是全球范围内严重威胁女性健康的恶性肿瘤之一。据世界卫生组织国际癌症研究机构（IARC）发布的2020年全球癌症负担数据显示，乳腺癌新增病例高达226万，超过了肺癌，成为全球第一大癌症，在我国，乳腺癌同样呈现出发病率持续上升的趋势，严重影响女性的身心健康和生活质量，给家庭和社会带来沉重的负担。

乳腺癌的发生发展是一个多基因参与、多步骤演变的复杂过程，其中HER2/neu基因在乳腺癌的诊疗中扮演着极为关键的角色。HER2/neu基因定位于人类17号染色体长臂（17q11.2-q12），编码相对分子质量为185×103的跨膜蛋白p185HER2，该蛋白属于人类表皮生长因子受体（EGFR）家族成员，具有酪氨酸激酶活性。正常生理状态下，HER2/neu基因参与调控细胞的生长、增殖、分化和迁移等重要生物学过程，维持机体的正常生理功能。然而，在大约20%-30%的乳腺癌患者中，HER2/neu基因会发生扩增或过表达，导致其编码的p185HER2蛋白过度表达，进而激活下游一系列信号传导通路，如PI3K/AKT、RAS/RAF/MEK/ERK等，促使细胞异常增殖、存活、侵袭和转移，使得肿瘤细胞具有更强的恶性生物学行为，显著增加了乳腺癌患者复发和转移的风险，降低了患者的生存率和生活质量。

准确检测HER2/neu基因状态对于乳腺癌患者的治疗决策制定和预后评估具有至关重要的意义。一方面，HER2/neu基因状态是乳腺癌靶向治疗的重要分子标志物。针对HER2阳性乳腺癌患者，以曲妥珠单抗为代表的抗HER2靶向治疗药物能够特异性地作用于HER2蛋白，阻断其信号传导，从而抑制肿瘤细胞的生长和增殖，显著提高患者的治疗效果和生存率。临床研究表明，对于HER2阳性早期乳腺癌患者，在辅助化疗基础上联合曲妥珠单抗治疗，可使患者的复发风险降低约50%；对于HER2阳性晚期乳腺癌患者，抗HER2靶向治疗联合化疗也能显著延长患者的无进展生存期和总生存期。因此，准确判断HER2/neu基因状态，能够筛选出真正能从抗HER2靶向治疗中获益的患者，避免不必要的治疗和药物不良反应，提高治疗的精准性和有效性。另一方面，HER2/neu基因状态也是评估乳腺癌患者预后的重要指标。大量研究证实，HER2阳性乳腺癌患者的预后明显差于HER2阴性患者，其复发转移风险更高，生存期更短。准确了解HER2/neu基因状态，有助于临床医生对患者的预后进行准确评估，为患者制定个性化的治疗方案和随访计划，提高患者的生存质量和生存期。

目前，临床上检测HER2/neu基因状态的方法主要包括免疫组织化学法（IHC）、荧光原位杂交法（FISH）、显色原位杂交法（CISH）等。其中，IHC主要检测HER2蛋白的表达水平，操作相对简便、成本较低，但该方法主观性较强，易受实验条件、判读标准等因素的影响，存在一定的假阳性和假阴性率；CISH虽然克服了FISH需要荧光显微镜的缺点，但其检测灵敏度和特异性相对较低，对于低水平HER2基因扩增的检测存在一定局限性。而FISH技术则是通过荧光标记的DNA探针与细胞核内的HER2/neu基因靶序列进行杂交，在荧光显微镜下直接观察基因的拷贝数和扩增情况，具有检测结果准确、客观、灵敏度高、特异性强等优点，能够准确区分HER2基因的扩增和非扩增状态，被公认为是检测HER2/neu基因状态的“金标准”。尤其在IHC检测结果为临界状态（2+）时，FISH检测能够提供更为准确的HER2基因状态信息，为临床治疗决策提供有力依据。然而，FISH技术在实际应用中仍存在一些问题，如检测流程复杂、操作要求高、检测成本相对较高等，这些因素限制了FISH技术在临床中的广泛应用。

因此，建立一套准确、稳定、简便且成本可控的乳腺癌HER2/neu基因荧光原位杂交诊断体系具有重要的临床意义和应用价值。本研究旨在通过优化FISH实验条件，建立标准化的乳腺癌HER2/neu基因FISH检测流程，并对其在临床乳腺癌样本检测中的应用进行评价，为乳腺癌的精准诊断和治疗提供可靠的技术支持，提高乳腺癌患者的诊疗水平和生存质量。

1.2国内外研究现状

国外对乳腺癌HER2/neu基因的研究起步较早，相关技术和应用也相对成熟。自HER2/neu基因被发现与乳腺癌的发生发展密切相关以来，国外科研人员和医疗机构开展了大量深入的研究工作。在检测技术方面，FISH技术作为检测HER2/neu基因状态的金标准，在国外临床实践中已