药用植物分子鉴定.pptVIP

检测：DNA芯片技术，必威体育精装版报道的微芯片电泳(Microchipelectrophoresis)，可以高速度地检测临床样品的SNP。杂交型芯片将等位基因特异寡核苷酸共价固定在载体表面，用荧光标记引物扩增基因组DNA，再与芯片上的寡核苷酸杂交形成信号，并行读取芯片上不同SNP荧光信号，获得SNP信息。第59页，共96页，星期日，2025年，2月5日SNP的优点数量多，分布广泛，检测快速、易于实现自动化，遗传稳定性高。SNP的缺点成本高，错误信号多。第60页，共96页，星期日，2025年，2月5日SNP标记的应用种群生物学特征、遗传性疾病检测、疾病关联分析及特定功能基因或片段的分型等研究，在基因组作图和数量性状定位等方面也有越来越多的应用。第61页，共96页，星期日，2025年，2月5日第三节药用植物的分子鉴定流程（实例）第62页，共96页，星期日，2025年，2月5日DNA测序法（DNASequencing）目前用于DNA测序的基因主要有：1.有叶绿体基因组的rbcL、matK；2.核基因组的rRNA、ITS等(植物类)；3.线粒体基因组的cty-b(动物类)。第63页，共96页，星期日，2025年，2月5日rbcL：基因分辨率高，变异较均一分布，进化速率差异大，一般用于科级以上分类群研究。matK：位于trnK基因的内含子中，长约1500碱基，编码成熟酶并参与RNA转录体中Ⅱ型内含子的剪切，是叶绿体基因组蛋白编码基因中进化速率最快的基因之一，变异较均一，一般用于种一级分类群亲缘关系研究。第64页，共96页，星期日，2025年，2月5日rRNA是编码核糖体DNA的基因，在植物中以重复连续排列方式存在，包含进化速率不等的编码区、非编码转录区和转录区，可选择较保守的片断如18S、5S的rRNA进行各种亲缘关系研究。第65页，共96页，星期日，2025年，2月5日1.串联重复序列，拷贝可达500~40000；不同ITS拷贝间的序列趋于相近或完全一致。核核糖体内转录间隔区Nuclearribosomeinternaltranscribespacer,ITS第66页，共96页，星期日，2025年，2月5日2.序列短，具有长度保守性(ITS1:187-298bp，ITS2:187-252bp)核核糖体内转录间隔区Nuclearribosomeinternaltranscribespacer,ITS第67页，共96页，星期日，2025年，2月5日3.核苷酸序列的高度变异性(每个区成对序列趋异百分率在4~10%)4.两侧都有高度保守的序列第68页，共96页，星期日，2025年，2月5日材料与方法收集中国境内柴胡标本29种36份，基本涵盖民间入药的所有品种。名称凭证标本采集时间采集地点多枝柴胡B.polyclonum谢晖0405170012004年5月云南会泽川滇柴胡B.candollei谢晖0405170022004年5月云南会泽柴胡（栽培）B.chinense晁志、张道广03080162003年8月陕西镇巴小柴胡B.hamiltonii晁志、张道广03080012003年8月云南昆明狭叶柴胡（红柴胡）B.scorzonerifolium晁志、张道广03070012003年7月安徽肥东空心柴胡B.longicaulevar.franchetii晁志、张道广03080112003年8月陕西镇巴第69页，共96页，星期日，2025年，2月5日参考书及相关文献资料参考书：1.《中药生物工程》,主编:高文远,上海科学技术出版社.2《中药现代生物技术》,主编:胡之璧,人民卫生出版社.3.《中药生物技术》,主编:贾景明,化学工业出版社.参考文献：1.徐红,王峥涛,胡之璧.中药DNA分子鉴定技术的发展与应用[J].中药现代化,2003,5(2):24-30.2.海学忠.DNA分子标记在中药鉴定中的应用进展[J].中外健康文摘,2012,9(35):442-446.3.陈士林,郭宝林,张贵君等.中药鉴定学新技术新方法研究进展[J].中国中药杂志,2012,37(8):1043-1055.第27页，共96页，星期日，2025年，2月5日第二节常用的分子标记第28页，共96页，星期日，2025年，2月5日1.限制性片段长度多态性（RFLP）RFLP原理：基因组DNA经限制酶切，可产生大量长短不一的片段。通过电泳可以将这些片段分离开。片段长的迁移速