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冠心舒检测

目录/Contents0102冠心舒氨基己糖的比色测定冠心舒N-乙酰氨基己糖的比色测定

冠心舒检测检测原理：冠心舒分子含有氨基己糖，可通过盐酸水解成游离的氨基己糖（氨基葡萄糖和N-乙酰氨基半乳糖），氨基己糖经碱性乙酰化反应后能与对二氨基苯甲醛（PDABA）呈色而进行定量。又由于两种氨基己糖在100℃和25℃下乙酰化程度不同，可进一步对它们做出鉴别定量。

冠心舒氨基己糖的比色测定检测试剂：0.33mol/L磷酸三钠；0.25mol/L四硼酸钠；磷酸三钠-四硼酸钠液：取98ml前者与2ml后者相混淆即得；乙酰丙酮试液I：3.5%（V/V），用磷酸三钠-四硼酸钠液配制；乙酰丙酮试液II：3.5%（V/V），用四硼酸钠液配制；PDABA试液：取PDABA0.16g溶于1.5ml12mol/L盐酸后以10.5ml异丙醇稀释后供用。

冠心舒氨基己糖的比色测定检测步骤：1．标准氨基己糖和样品预处理：分别精密称取盐酸氨基半乳糖（相当于氨基半乳糖1.0mg）和样品（相当0.2mg氨基己糖）于带有螺旋盖的玻璃观众，按1mg：1ml加6mol/L盐酸。在100℃下加热3小时，冷却后在70℃下脱酸挥干。干后加少量蒸馏水重复两次。氨基半乳糖按1mg：10ml用蒸馏水溶解，用作标准溶液用。样品以1mg：4ml蒸馏水溶解。

冠心舒氨基己糖的比色测定检测步骤：2．标准曲线制备和样品总氨基己糖测定：精密吸取上述标准溶液0、0.1、0.2、0.3和0.4ml于带塞试管中，以蒸馏水补加至0.40ml。加入0.3ml乙酰丙酮试液I，混匀，于100℃水浴中加热30分钟。冷却后加入1mlPDABA试液。5分钟后，以“0”管作对照，测定在535nm处的光吸收值并绘制标准曲线。另取样品0.4ml，按照标准曲线制备操作。以试剂作对照，测定光吸收值，由标准曲线计算氨基己糖含量。

冠心舒氨基己糖的比色测定检测步骤：3．标准曲线制备和样品氨基半乳糖测定：精密吸取上述标准溶液0、0.1、0.2、0.3和0.4ml于带塞试管中，以蒸馏水补加至0.40ml。加入0.3ml乙酰丙酮试液II，混匀，于25℃水浴中保温2小时，加入1mlPDABA试液。混匀后再50℃下保温15分钟。室温下放置30分钟后于530nm处测读光吸收，以“0”管作对照。由浓度对光吸收绘制标准曲线。另吸取样品液0.4ml，与0.3ml乙酰丙酮试液II混合后按标准曲线制备操作。以试剂混合液做对照，测定光吸收，由标准曲线求出样品中氨基半乳糖含量（氨基葡萄糖不呈色）。由样品的总氨基己糖含量与氨基半乳糖含量之差，即算出氨基葡萄糖的含量。

冠心舒N-乙酰氨基己糖的比色测定检测原理：冠心舒中的长链经各种N-乙酰氨基己糖糖苷酶和糖胺聚糖裂解酶作用出的N-乙酰氨基己糖可利用Reissig法比色测定。本法适用于游离的和位于寡糖链还原性端基的N-乙酰氨基己糖的定量分析。

冠心舒N-乙酰氨基己糖的比色测定检测试剂：四硼酸钾试液：1.5g四硼酸钾（4mol结晶水）置于25ml容量瓶中，加20ml水溶解后，加水至刻度；对二甲氨基苯甲酸（PDABA）试液：5gPDABA溶于50ml含12.5%盐酸（V/V）的冰乙酸中，名为贮备液。临用前取一份以9倍体积的冰乙酸稀释。N-乙酰氨基己糖标准溶液：80μg/mL。

冠心舒N-乙酰氨基己糖的比色测定检测操作：1．标准曲线制备：精密吸取标准溶液0、0.05、0.10、0.15、0.20和0.25ml于带塞试管中，补加水至0.25ml。加入四硼酸钾试液0.05ml。混合液在沸水浴加热3分钟，立即用流动水冷却至室温。继续加1.5mlPDABA试液。摇匀后在37℃水浴中保温20分钟。以0管作对照，测定各管在585nm处光吸收并绘制标准曲线。

冠心舒N-乙酰氨基己糖的比色测定检测操作：2．样品测定：吸取样品溶液0.25ml（相当于4～16μg乙酰氨基己糖），加入四硼酸钾试液。其余步骤同标准曲线制备操作。以试剂混合液作对照，测定光吸收值，按标准曲线计算含量。

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