液相色谱应化.pptVIP

优点：由于每种物质几乎都有各自不同的折射率，因此都可以用示差折光检测器来检测，示差折光检测器是一种通用型检测器，对所用物质都有响应，如同气相色谱仪的热导检测器缺点:(1)灵敏度较低;(2)对温度和流量变化敏感，必须精确控制温度和流量;(3)不能用于梯度洗脱。一般用于无紫外吸收的物质第31页，共84页，星期日，2025年，2月5日4）电导检测器原理：是基于待测物在一些介质中电离后所产生的电导变化来测量电离物质的含量。电导检测器的主要部件是电导池特点：电导检测器对分子不响应，对离子则是通用型的，它对温度和流量敏感，因此必须严格控制温度和流量，并且不适用于梯度洗脱第32页，共84页，星期日，2025年，2月5日原理：从色谱柱中流出的流动相进入雾化室,在雾化气体作用下,样品组分生成气溶胶，之后溶剂逐渐蒸发，形成只含溶质的微小颗粒，微小颗粒在强光照射下产生光散射,散射光与组分含量成正比5.蒸发光散射检测器第33页，共84页，星期日，2025年，2月5日蒸发光散射检测器是质量型、通用检测器，特别适合无紫外吸收的样品，主要应用于糖类、高级脂肪酸、磷脂、维生素、甾类等化合物使用此检测器条件是组分必须能雾化并且能形成小颗粒,流动相不能含有不挥发的盐类第34页，共84页，星期日，2025年，2月5日HPLC一般都带有数据处理系统或色谱工作站，除记录色谱图外，还能自动记录峰的保留时间,自动对峰面积积分5数据记录和结果处理系统第35页，共84页，星期日，2025年，2月5日一对流动相的要求（1）纯度要高：一般用色谱纯试剂，还要进一步纯化；使用前要过滤除去微粒以免堵塞；脱气，以免在柱中或检测器中产生气泡而影响分离和检测§4.3HPLC流动相和固定相

第36页，共84页，星期日，2025年，2月5日（2）与固定相不互溶、不反应：即不能使用能引起柱效损失或保留特性变化的溶剂，如吸附色谱法的流动相不能含水，硅胶色谱柱不能用碱性溶剂，液液色谱法中流动相应该与固定相互不相溶以免引起固定相流失等（3）溶剂对于试样要有适宜的溶解度：以免试样在柱中沉淀而造成堵塞，更换流动相时必须保证互溶第37页，共84页，星期日，2025年，2月5日（4）粘度适中：若使用高粘度溶剂，势必增高压力，不利于分离，常用的低粘度溶剂有丙酮、乙醇、乙腈等；但粘度过于低的溶剂也不宜采用，例戊烷、乙醚等，它们易在色谱柱或检测器内形成气泡，影响分离第38页，共84页，星期日，2025年，2月5日（5）溶剂要与检测器匹配紫外光度检测器：应注意选用检测器波长比溶剂的紫外截止波长要长溶剂的紫外截止波长：当小于截止波长的辐射通过溶剂时,溶剂对此辐射产生强烈吸收，此时溶剂被看作是光学不透明的示差折光检测器：要求选择与组分折光率有较大差别的溶剂作流动相，以达最高灵敏度第39页，共84页，星期日，2025年，2月5日第40页，共84页，星期日，2025年，2月5日二固定相1.按承受压力分刚性固体：SiO2为基质，耐压为7.0×108~1.0×109Pa。可制成直径、形状和孔隙深度不同的颗粒；主要用于吸附、分配和键合色谱硬胶：以聚合物为基质(常用苯乙烯与二乙烯苯交联而成)，耐压上限为3.5×108Pa,主要用于离子交换和尺寸排阻色谱第41页，共84页，星期日，2025年，2月5日2.按孔隙深度分表面多孔型：以实心玻璃珠为基体，在基体表面覆盖一层多孔活性材料(如硅胶、氧化铝、离子交换剂、分子筛、聚酰胺等)。表面多孔型固定相的颗粒大(易装柱)、多孔层厚度小且孔浅(渗透性好，出峰快)；但交换容量小；适于常规分离分析全多孔型：全部由硅胶或氧化铝微粒聚集而成，因颗粒极细，因而孔径小、传质快、柱效高；特别适于复杂混合物的分离第42页，共84页，星期日，2025年，2月5日第43页，共84页，星期日，2025年，2月5日§4.4HPLC主要类型及分离原理

吸附色谱1原理各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心，利用吸附剂对不同组分的吸附能力差异实现分离第44页，共84页，星期日，2025年，2月5日2固定相一般为吸附活性强弱不等的吸附剂：极性吸附剂包括硅胶、氧化铝、氧化镁、硅酸镁、分子筛及聚酰胺等，非极性吸附剂最常见的是活性炭极性吸附剂可进一步分为酸性吸附剂和碱性吸附剂。酸性吸附剂包括硅胶和硅酸镁等，适于分离碱，如脂肪胺和芳香胺；碱性吸附剂有氧化铝、氧化镁和聚酰胺等，适于分离酸性溶质，如酚、羧酸和吡咯衍生物等第45页，共84页，星期日，202