《医学微生物技术》——实训单--水中细菌菌落总数测定.docxVIP

实训项目单

医学生物技术教研室编制人：审核人：编制日期：2020.07.01

项目编号

ItemNO.

5

项目名称

Item

水中细菌总数检测

实训学时

Time

8

课程名称

Course

医学微生物技术

实训地点

Location

微生物生产实训室

承担部门

TrainingDept.

医学生物技术教研室

实训对象（系部、专业）：

医学生物技术-医学生物技术专业

实训目的：

能力目标：

1.验证水中存在微生物；

2.能正确进行水中细菌总数的检测；

3.能正确书写检验报告。

知识目标：

1.熟悉平板菌落计数法及计数原理；

2.熟悉菌落报告规则。

职业素养与态度目标：

1.树立无菌观念、质量意识与责任意识；

2.学习认真，态度积极，操作细心；

3.分工合作完成检验任务，增强协作精神与沟通能力

实训原理：

1.水中含有一定数量的微生物，我国饮用水的卫生标准是：细菌总数每毫升不得超过100个。

2.平板菌落计数法：将水涂布于营养琼脂表面，经培养后水中的细菌就会生长，形成肉眼可见的菌落。能直接反映检样中活菌的数量。

场地要求（可容纳的班数、人数等）

班级：1班人数：30人地点：307（大屏幕电脑）、326

安全要求：

同“同微生物生产实训室安全规则”

教学组织要求：

1．28人/班，共二班

2．指导教师：主讲教师1名

实训步骤：

配液、准备灭菌物品---灭菌---样品处理----稀释----注皿----倾注培养基----培养----菌落计数----报告

组织教学流程：

导论（工作任务某生物制品公司微生态活菌制品的细菌总数检查）---学生了解实训物品---讲解实训步骤及注意事项；学生配制培养基、准备需灭菌物品---灭菌---知识点讲解---学生采水样、10倍系列稀释；教师示教；加样，倒平板，空白对照----培养---观察菌落特征并正确计数---发报告---结果分析及总结---清理实验台、物品处理、洗刷灭菌，布置课后完成实训报告

第二天观察菌落特征并计数。

分组讨论，按组别先后顺序向老师汇报方案，老师对每组实验方案进行分析其可行性。指出问题。

本项目结束后对学生单项技能考核两项：样品的稀释；高压蒸汽灭菌锅的使用。每名学生计成绩。

讨论

平板上没有菌落生长是什么原因，现象是否正常？

平板上长出菌苔一片或者菌落融合是什么原因？

为什么需要对样本进行稀释后再测定细菌总数？

设备仪器清单（每组）

仪器、设备名称

型号

产地

数量规格/每组

单价（元）

使用时数

备注

电子天平

1/组

药匙

2/组

试管架

1/组

玻棒

20cm

1/组

锥形瓶、塞

250ml

3/组

恒温培养箱

1走廊

超净工作台

1台/组

电磁炉及配套锅

1

融化培养基用

水浴锅

1

防止培养基凝固用

试管、塞

4个/组

10ml移液管

3个/组

1ml移液管

5个/组

高压蒸汽灭菌锅

1台/全班

耗材清单（每组）

耗材名称

型号

产地

数量规格/每组

单价（元）

小计（元）

备注

pH试纸（6-8）

4板

培养皿（7cm）

8个/组

1mol/LNaOH

1瓶/全班

1mol/L盐酸

1瓶/全班

纯化水

1桶/全班

营养琼脂培养基

2瓶/全班

NaCl

1瓶/全班

牛皮纸

若干

线绳或皮套

6

酒精灯

1个/组

烧杯

500ml

1个/组

量筒

200ml

1个/组

称量纸

4片/全班

酒精喷壶

1个/组

瓶装75%酒精棉球及镊子

1套/组

放在2个超净台里

洗涤剂

1

垃圾桶

1

记号笔

1

实训操作过程

操

作

步

骤

与

要

求

步骤

一、配制培养基及物品准备（每组的量）

1．自来水或瓶装矿泉水1瓶

2．培养基及稀释液：

营养琼脂培养基（200ml/组）

pH值7.0无菌氯化钠溶液（50ml/组）

3．器皿（每组用量）：

150ml锥形瓶2个、7cm培养皿15个、10ml大口刻度吸管3支、1ml刻度吸管5支、试管4个、烧杯1个、250ml量筒1个、100ml容量瓶1个、玻璃滴管适量

二、需灭菌物品包扎后高压蒸汽灭菌121℃，20min。

三、供试液的制备

1．水样稀释

水样10倍系列稀释。

称取供试品10ml，加pH值7.0无菌氯化钠溶液至100ml，混匀，制成1：10供试液。

用1支1ml刻度吸管吸1：10供试液各1ml，分别加入至3个无菌平皿中；同时吸1：10供试液1ml加入装有9mlpH值7.0无菌氯化钠溶液的试管中，制成1：100稀释液。

换用另1支1ml灭菌吸管，反复吹吸混匀1：100稀释液，用该支灭菌吸管吸1：100供试液各ml，分别加入至3个无菌平皿内；同时吸1：100供试液1ml加入装有9mlpH值7.0无菌氯化钠溶液的试管中，制成1：1000稀释液。

换用另1支1ml灭