动物性食品中大肠菌群的检验.pptxVIP

第二节食品中大肠菌群的检验

通过MPN检索表的检索得出实验结果。掌握检验的程序和步骤。了解大肠菌群在食品检验中的意义。CBA一、实验目的

大肠菌群系指一群在32～37℃下24h内，能发酵乳糖产酸、产气、需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌群主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标，来评价食品卫生质量，具有广泛的卫生学意义。01食品中大肠杆菌群数是以每100mL（g）检样内大肠菌群最近似数（MPN）来表示，据此含义，所有食品卫生标准中所规定的大肠菌群数均应为100mL（g）食品内允许含有大肠菌群的实际数值，为报告标准。02二、基本原理

GB4789.3-2010《大肠菌群计数》大肠菌群PetrifilmTM测试纸片法美国FDA标准方法（行业标准采用两步法）：用于对出口食品中大肠菌群进行检验牛天贵主编《食品微生物学实验技术》实验十二大肠菌群检验三、检测方法

初发酵复发酵（证实试验）分离培养

实验操作步骤：乳糖发酵试验分离培养证实试验样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。根据证实为大肠杆菌阳性的管数，查MPN表，报告每100ml（g）大肠菌群的MPN值。

乳糖胆盐发酵管（初发酵）伊红美蓝琼脂培养基（鉴别培养基分离培养）乳糖发酵管（复发酵）010203实验所需培养基及作用

1、乳糖胆盐发酵管成分：蛋白胨20g、猪胆盐5g、乳糖10g、0.04%溴甲酚紫水溶液25mL、蒸馏水1000mL，pH值7.4制法：略实验现象：如图

2、伊红美蓝琼脂培养基（EMB）成分：蛋白胨10g、乳糖10g、K2HPO42g、琼脂17g，2%伊红Y溶液20mL、0.65%美蓝溶液10mL，蒸馏水1000mL，pH值7.1制法：将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正pH值，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min备用；临用时加入乳糖（115℃20min）并加热融化琼脂，冷至50～55℃，加入伊红和美蓝溶液），摇匀后倾注平板。

现象及原理2、伊红美蓝琼脂培养基（EMB）大肠杆菌：菌落深紫色，且有绿色金属光泽；产酸能力较弱的几种肠道菌：也有相应的棕色；不发酵乳糖的肠道菌：菌落是无色透明的，比如变形菌属，沙门氏菌属

成分：蛋白胨20g、乳糖10g、0.04%溴甲酚紫水溶液25mL、蒸馏水1000mL，pH值7.4制法：将蛋白胨及乳糖溶于水中，校正pH值，加入指示剂，分装3mL试管，并放入一个小倒管，115℃灭菌15min。3、乳糖发酵管

将25mL（或g）检样置于含225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶，充分振摇（固体检样用匀浆器，用8000－10000r/min的速度处理1min）制成1：10的均匀稀释液。01用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内，混匀，制成1：100的稀释液。02另取1mL灭菌吸管，按②操作依次做10倍递增稀释液，每稀释一次，换用一支1mL灭菌吸管。03检样稀释（无菌操作）实验操作步骤：

2）乳糖发酵实验接种1mL待检样品于乳糖胆盐发酵管内。接种3个稀释度，每一稀释度接种3管，置（36土1)℃温箱内培养（24士2)h。如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠杆菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行。

分离培养将产气的发酵管分别转接在伊红美蓝琼脂平板上，置（36士1)℃恒温箱内培养18～24h。取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。

证实试验在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1一2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置（36士1)℃恒温箱内培养（24士2)h，观察产气情况。凡乳糖产酸产气、革兰氏染色为阴性的无芽袍杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。

37℃培养48h37℃培养24h证实产气（阳性）结果与否镜检（革兰氏阴性菌）0337℃培养24h取有核心和带金属光泽的深紫色菌落进行革兰氏染色02乳糖蛋白胨培养液取产酸产气的发酵管中培养液在伊红美兰平板上进行划线01

根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL（或g）大肠菌群的MPN。01结果表示方法：120MPN/100mL（g）02附表：大肠菌群最大可能数（MPN）检索表03实验报告

0102本表采用3个稀释度：1ML(g)，0.1mL(g）和0.01mL(g)。每稀释度3管。表内所列检样量如改用10mL(g)，1mL(g）和0.1mL(g）时，表内数字应相应降低10倍；如改用0.1ML(g)